Vježba 15 Flashcards

1
Q

kaj koristimo (plazmid, bakterija, gen koji ugrađujemo)

A

plazmid: pGLO
bakterija: E. coli HB101
gen: GPF (green fluorescent protein)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
2
Q

kakav agar se koristi i kaj sve sadrži

A

LB agar –> triptofan, sol, kvašćev ekstrakt, agar

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
3
Q

kak radimo petrijevke

A

bez DNA: LB+bakterije, LB+bakterije+ampicilin

s DNA: LB+bakterije+ampicilin, LB+bakterije+ampicilin+arabinoza

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
4
Q

kak arabinoza oboji rezistentne bakterije

A

zeleno

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
5
Q

kad se koristi metoda PCR

A

dok želimo imati više kopija jedne DNA

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
6
Q

koja je ključna činjenica u PCR-u

A

DNA se na višim temp ne uništava nego se odvajaju lanci, pri nižim temp se ponovno spajaju

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
7
Q

kaj je sve potrebno za PCR

A
DNA primer (za početak sinteze)
dušične baze
DNA polimeraza (Taq polimeraza - otporna na visoke temp)
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
8
Q

proces u PCR-u

A
  1. povisi temp - razdvajanje lanaca
  2. snižavanje temp - primaza se spoji na jednostruke lance
  3. sinteza drugog lanca
  4. povišenje temp, rastaljivanje novog lanca za aplifikaciju
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
9
Q

gdi se čuvaju dobiveni geni u PCRu

A

u DNA bibliotekama

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
10
Q

kakva DNA se može koristiti pri PCRu

A

bez introna (jer bakterije nemaju introne niti ih prepoznaju)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
11
Q

kak se dobiva DNA bez introna

A

reverznom transkriptazom

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
12
Q

kaj je reverzna transkriptaza

A

DNA polimeraza koja stvara DNA lanac prema mRNA –> nastaje DNA komplementarna mRNA, bez introna

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
13
Q

kak se zove DNA koju sintetizira reverzna transkriptaza

A

cDNA (copy DNA –> nema introne)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
14
Q

zakaj se koristi PCR pri detekciji virusne/bakterijske infekcije

A

jer je u serumu preniska razina virusne DNA, pa se treba umnožiti da bi se detektirala

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
15
Q

iz čega je sintetizirana Taq polimeraza

A

thermus aquaticus

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
16
Q

u DNA imamo sekvence koje kodiraju za

A

proteine, tRNA, rRNA, siRNA

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
17
Q

koje su nekodirajuće sekvence DNA

A
regulatorne sekvence (pojačivači, utišivači...)
junk DNA (introni, repetitivna DNA)
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
18
Q

na kaj se dijeli repetitivna DNA

A

visoko ponovljene sekvence

srednje ponovljene sekvence

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
19
Q

kaj su visoko ponovljene sekvence

A

satelitna DNA - centromere, telomere

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
20
Q

kaj su srednje ponovljene sekvence

A

minisateliti
mikrosateliti
retrotranspozoni

21
Q

kaj su minisateliti

A

ponavljajuća sekvenca od 1-20 kb

22
Q

kak se naziva čitava regija kod minisatelita

A

VNTR (variable number of tandem repeats

23
Q

da li varijabilnosti VNTR-a utječu na fenotip

A

Ne

24
Q

kakav je VNTR od osobe do osobe

A

karakteristični su za svakog pojedinca

25
Q

kaj se dobije dok endonukleazom pocijepas DNA i dobijes dijelove različitih duljina

A

fragmenti RFLP (restriction fragment lenght polymorphism) - sadrže te VNTR koji su različitih duljina

26
Q

kad, osim nasljeđivanjem, mogu nastati minisateliti

A

mogu nastati sporadično - pojava SNP (single nucleotide polymorphism) koji mijenja jedan nukleotid - može nastati mutacija ako je na egzonu

27
Q

minisateliti služe i ko markeri za

A

specifične gene –> može se pratiti prijenos gena za određene bolesti

28
Q

kaj su mikrosateliti

A

sekvence dužine 1-6 parova baza

29
Q

kak se zovu regije koje sadrže nekoliko mikrosatelita

A

STR (short tandem repeats)

30
Q

kak se nasljeđuju STR fragmenti

A

kodominantno

31
Q

kak bi se homozigotni i heterozigotni STR pokazivali na elektroforezi

A

homozigotno - jedna linija

heterozigotno - dvije linije

32
Q

koliko se u STR lokusa koristi u forenzici (kolko dvije osobe ne mogu imati zajednička)

A

13

33
Q

koji je cilj hibridizacije nukleinskih kiselina

A

pronaći u DNA biblioteki sekvencu koja kodira za nekaj čemu znamo slijed baza, ali ne lokus

34
Q

kakva DNA se koristi kod hibridizacije

A

jednolančana - dobijemo ili visokom temperaturom ili upotrebom alkalne otopine

35
Q

koji mehanizam se koristi pri hibridizaciji nukleinskih kiselina

A

imamo pretraživačku sondu - jednolančana DNA s točno određenom sekvencom koja ima neki biljeg (najčešće 32P koji fluoriscira)

36
Q

FISH

A

fluorescent in situ hybridisation - koristi se DNA s 32P biljegom koji će uzrokovati fluorescenciju ako se spoji s komplementarnim DNA lancem

37
Q

jesu li sve hibridizacije iste točnosti

A

ne - razlikujemo one visoke točnosti (potpuno komplementarni lanci) i one smanjene točnosti (uzvojnice koje nisu potpuno komplementarne)

38
Q

kaj znači in situ

A

na licu mjest - kod FISH-a to znači unutar jezgre/citoplazme (ne treba izolirati DNA)

39
Q

koja metoda se zna koristiti u preimplantacijskoj dijagnostici

A

FISH

40
Q

vrste blottinga

A

dna - southern
rna - northern
proteini - western

41
Q

kak funkcionira blotting

A
endonukleaza razvoji DNA na fragmente
razdvoje se elektroforezom
lanci se razdvoje u alkalnoj otopini
inkubiraju se sa sondom
komplementarni lanci traže se autoradiografijom
42
Q

kad se koristi blotting

A

za dokazivanje postojanja određene molekule

43
Q

sekvenciranje DNA je

A

određivanje redoslijeda nukleotida

44
Q

dvije metode za sekvenciranje DNA

A

sangerova dideoksi metoda

maxam-gilbertova metoda

45
Q

kak funkcionira sanger dideoksi metoda

A

stavimo u 4 epruvete jednolancanu DNA, radioaktivni primer, normalne nukleitde i dideoksirivonukleozidforfate za svaku bazu koji će zaustaviti polimerizaciju na točno određenoj bazi

46
Q

za kaj bakterije koriste CRISPR Cas 9 metodu

A

za imunost

47
Q

basic funkcioniranje CRISPR Cas 9

A

razrezivanje DNA virusa i smještanje u CRISPR lokus
proizvodnja RNA od tih fragmenata - crRNA
Cas 9 (endonukleaza) koju uzmjerava crRNA reže virusnu DNA pri ponovnom kontaktu

48
Q

kompleks za razrezivanje virusne DNA kod CRISPR

A

crRNA
Cas9
trans-aktivirajuća RNA (trRNA)

49
Q

kaj treba Cas 9 za svoje funkcioniranje

A

PAM domenu - ona je neposredno nakon 3’ kraja sekvene koju trebamo izrezati