ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ ΔΝΑ

Question 1

Ποια προβλήματα αντιμετωπίζουμε κατά την απομόνωση του ΔΝΑ

Answer 1

1. Το σπάσιμο των μεμβρανών
2. Την δράση των ενζύμων που απελευθερώνονται και πρέπει είτε να τα καταστρέψουμε είτε να αναστείλουμε την λειτουργία τους
3. Η διαδικασία της συλλογής του ΔΝΑ μέσα από υδατικό διάλυμα που περιέχει θραύσματα μεμβρανών, πρωτεΐνες, ΡΝΑ, και ένζυμα

Question 2

Ποιοι είναι οι στόχοι στην απομόνωση του ΔΝΑ;

Answer 2

ΑΠΟΔΟΣΗ( μεγάλη ποσότητα ΔΝΑ, καθαρότητα, ακέραιο)
ΤΑΧΥΤΗΤΑ (απλή και γρήγορη διαδικασία απομόνωσης)
ΑΞΙΟΠΙΣΤΗ
ΑΣΦΑΛΗΣ
ΟΙΚΟΝΟΜΙΚΗ

Question 3

Ποια είναι τα στάδια απομόνωσης του ΔΝΑ;

Answer 3

1. Διάσπαση συνδετικών ιστών
2. Διάρρηξη κυττάρων, κυτταροπλασματικών μεμβρανών, οργανιδίων
3. Απενεργοποίηση των νουκλεασών
4. Διαχωρισμός νουκλεικών οξέων από πρωτεΐνες
5. Απομάκρυνση ΡΝΑ
6. Απομάκρυνση ΔΝΑ

Question 4

Πως γίνεται η διάσπαση κυτταρικών ιστών και η διάρρηξη των κυττάτων;

Answer 4

ΟΜΟΓΕΝΟΠΟΙΗΣΗ
Α) μηχανικές μεθόδους (μπλέντερ/γουδί, υπέρηχοι, ψύξη- απόψυξη, ξήρανση)
Β) χημικές μεθόδους( διάλυμα λύσης, απορρυπαντικά, διαλύτες)

Question 5

κεφαλές

Answer 5

υδρόφιλες

Question 6

ουρές

Answer 6

υδρόφοβες

Question 7

Πως ονομάζεται το σύμπλοκο απορρυπαντικού- λιπιδίου;

Answer 7

μικκύλιο

Question 8

Πως γίνεται η απενεργοποίηση των Νουκλεασλων;

Answer 8

α) EDTA (Αιθυλενοδιαμινοτετραοξικό οξύ) Δεσμέυει τα ιόντα Mg ++, απαραίτητος παράγοντας για τη λειτουργικότητα των νουκλεασών
β) Απορρυπαντικό Επιβραδύνει την δράση τους
γ) Εργασία στον πάγο (μειώνει την δραστικότητα τους, σταθεροποιεί το ΔΝΑ, προστασία από άλλες επιδράσεις)

Question 9

Πως διαχωρίζουμε τα νουκλεικά οξέα από πρωτεΐνες ;

Answer 9

α) Ενζυμική Πέψη
β) Υψηλή συγκέντρωση άλατος
γ) Χρήση απορρυπαντικών
δ) Προσθήκη φαινόλης ή χλωροφόρμιο- ισοαμυλική αλκόολη

Question 10

Πως γίνεται η απομάκρυνση του ΡΝΑ;

Answer 10

με RNase

Question 11

Πως γίνεται η καταβύθιση του ΔΝΑ ;

Answer 11

Η κατακρήμνιση του ΔΝΑ γίνεται με παγωμένη αλκοόλη, συνήθως ισοπροπανόλη ή αιθανόλη

Question 12

Ποια είναι η χρήση του φασματοφωτομέτρου;

Answer 12

α) Μέτρηση συγκέντρωσης ΔΝΑ
β) Έλεγχος της καθαρότητας του

Question 13

Τι είναι η φυγόκεντρος;

Answer 13

Είναι μια συσκευή , που αποτελεί εργαστηριακό εξοπλισμό και ασκεί φυγόκεντρο δύναμη σε κάθε δείγμα
χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό ενός στερεού από ένα υγρό ή ενός υγρού από ένα άλλο υγρό διαφορετικής πυκνότητας

Question 15

Ποια είναι η διαφορά της φυγόκεντρου με κινητούς βραχίονες και φυγόκεντρου σταθερής γωνίας

Answer 15

κινητούς βραχίονες δίνει περισσότερο ίζημα
σταθερή γωνία παίρνει περισσότερη ποσότητα

Question 16

Πως λειτουργεί η φυγοκέντρηση ;

Answer 16

Σε δεδομένη φυγόκεντρο δύναμη, ο διαχωρισμός συνιστάται σε καθίζηση ενός μίγματος στον πυθμένα του σωληναρίου αφήνοντας ένα υπερκείμενο εναιώρημα. Η καθίζηση καθορίζεται μεταξύ των άλλων, από το μέγεθοςκαι την πυκνότητα των σωματιδίων του συστήματος.

Question 17

Ποια είναι τα είδη της φυγοκέντρησης;

Answer 17

1. Διαφορική φυγοκέντρηση
2. Φυγοκέντρηση σε βαθμίδωση πυκνότητας
   α) Διαχωρισμός με βάση την ταχύτητα καθίζησης- φυγοκέντρηση ταχύτητας
   β) καθίζηση ισορροπίας- φυγοκέντρηση ισορροπίας

Question 18

Πως λειτουργεί η διαφορική φυγοκέντρηση ;

Answer 18

Η φυγοκέντρηση διαχωρίζει τα κυτταρικά συστατικά με βάση το μέγεθος και την πυκνότητα της
Τα μεγαλύτερα και πυκνότερα συστατικά δέχονται τη μεγαλύτερη φυγόκεντρο δύναμη και μετακινούνται πιο γρήγορα, καθιζάνουν στον πυθμένα του σωληναρίου
Τα μικρότερο λιγότερο πυκνά συστατικά, παραμένουν στο εναιώρημα πάνω από το ίζημα

Question 19

Πως λειτουργεί η φυγοκέντρηση σε βαθμίδωση πυκνότητας;

Answer 19

Τα οργανίδια διαχωρίζονται με καταβύθιση σε ένα διάλυμα που περιέχει προοδευτικά αυξανόμενες από επάνω προς τα κάτω συγκέντρωσης μιας ουσίας υψηλής πυκνότητας, πχ σουκρόζης

Question 20

Γιατί σε βαθμίδωση πυκνότητας και όχι διαφορική φυγοκέντρηση;

Answer 20

Τα κλάσματα που προκύπτουν από τη διαφορική φυγοκέντρηση αντιστοιχούν σε εμπλουτισμένα, αλλά ακόμη όχι καθαρά, παρασκευάσματα οργανιδίων
Στην φυγοκέντρηση σε βαθμίδωση πυκνότητας υπάρχει υψηλότερος βαθμός καθαρισμού είναι δυνατόν να επιτευχθεί

Question 21

Που βασίζεται η ηλεκτροφόρηση;

Answer 21

Βασίζεται στην μετακίνηση φορτισμένων μορίων κάτω από την επίδραση ενός ηλεκτρικού πεδίου

Question 22

Ποιες είναι οι εφαρμογές της ηλεκτρφόρησης;

Answer 22

1. Διαχωρισμός μακρομορίων
2. Στον έλεγχο της καθαρότητας του δείγματος
3. Στον ποσοτικό και ποιοτικό έλεγχο
4. Στον προσδιορισμό του μοριακού βάρους

Question 23

Πως χρησιμεύει το πήκτωμα αγαρόζης στην ηλεκτροφόρηση;

Answer 23

Διαχωρισμό του DNA ή του RNA (εξαιτίας της διαφοράς βάρους, τα μικρότερα μόρια μετακινούνται πιο γρήγορα)
έλεγχος καθαρότητας

Question 24

Ποιος είναι ο ρόλος του βρωμιούχου αιθιδίου;

Answer 24

ανοίγει ελαφρώς την διπλή έλικα και φθορίζει σε υπεριώδη ακτινοβολία

Question 25

Ποιες είναι οι εφαρμογές ηλεκτροφόρησης σε πηκτή πολυακριλαμίδης;

Answer 25

Στον βαθμό καθαρότητας Στον προσδιορισμό του μοριακού βάρους Στον προσδιορισμό του αριθμού των πολυπεπτιδικών αλυσίδων

Question 26

Τι είναι το ισοηλεκτρικό σημείο εστίασης;

Answer 26

Το σημείο όπου το ολικό φορτίο της πρωτεΐνης είναι ουδέτερο

Question 27

Πως μπορούν να διαχωριστούν οι πρωτεΐνες;

Answer 27

Οι πρωτεϊνες μπορούν να διαχωριστούν σύμφωνα με το μέγεθος, το σχήμα, το φορτίο, τον υδρόφοβο χαρακτήρα και τη συγγένειά τους για άλλα μόρια.

Question 28

3 είδη χρωματογραφίας

Answer 28

1. Ιοντοανταλλακτική χρωματογραφία 2. χρωματογραφία διήθησης σε πήκτη 3. χρωματογραφία χημικής συγγένειας

Question 29

Που στηρίζεται η ηλεκτροφόρηση σε πηκτή αγαρόζης;

Answer 29

Τα περισσότερα μακρομόρια διαχωρίζονται ανάλογα με το μέγεθος τους καθόσον είναι ηλεκτρικά φορτισμένα. Επομένως όταν βρεθούν σε ηλεκτρικό πεδίο κινούνται με ταχύτητα που εξαρτάται από τον λόγο του ηλεκτρικού φορτίου προς τη μάζα τους

Question 30

Σε τι πηκτή πραγματοποιείται η ηλεκτρφόρηση;

Answer 30

Σε πηκτή αγαρόζης ή πολυακρυλαμίδης

Question 31

Τι είναι το SDS και ποιος είναι ο ρόλος του;

Answer 31

Είναι ανιονικό απορρυπαντικό που α) Διαλύει τις κυτταρικές μεμβράνες β) αποδιοργανώνει τα συμπλέγματα πρωτεινών μεταξύ τους και με το ΔΝΑ γ) αναστέλλει την δράση των νουκλεασών

Question 32

Τι είναι το χλωροφόρμιος

Answer 32

Είναι οργανικό διαλύτης, που παγιδεύει τα κυτταρικά συστατικά που έχουν υδρόφοβο χαρακτήρα (όπως τα μεμβρανικά λιπίδια, υδρόφοβες πολυπεπτιδικές αλυσίδες ή πολυσακχαρίτες)