Diagnóstico molecular de patógenos Flashcards
¿Qué es el diagnóstico molecular?
Aplicación de técnicas de biología molecular detectando y cuantificando secuencias génicas específicas
¿Cuáles son las etapas del diagnóstico molecular?
- Preanalítica
- Analítica
- Posanalítica
¿En qué consiste la fase preanalítica?
Solicitud del análisis y recolección de la muestra
¿Qué buscamos analizar cuando se quiere detectar la estructura genómica?
ADN
¿Qué buscamos analizar cuando se quiere detectar la expresión génica?
ARNm
¿Qué buscamos analizar cuando se quiere detectar genomas extraños?
ADN/ARN exógeno
¿En qué consiste la fase analítica?
Procedimiento de la muestra, determina, mide y describe la presencia o ausencia de sustancias
¿En qué consiste la fase posanalítica?
En la evaluación e informe
Menciona algunas características del diagnóstico molecular que lo hacen diferente al tradicional
- Comprende la probabilidad de recurrencia real
- Minimiza errores
- Detección múltiple
- Mayor sensibilidad y especificidad
- Mayor rapidez
-Limitaciones son costos más elevados y desregulación de oferta y calidad de los test
¿Que detectan las pruebas serológicas?
La presencia de antígenos y/o anticuerpos en el suero o fluidos corporales
¿Cuál es la diferencia entre una prueba directa e indirecta serológica?
Prueba directa detecta antígenos y prueba indirecta detecta anticuerpos
¿Cuáles son las características de la expresión génica espacial y temporal?
Espacial acorde a la célula y función que vamos a explorar y temporal acorde al estado metabólico del paciente
¿Qué son las pruebas secundarias serológicas?
Aquellas en las cuales la reacción antígeno-anticuerpo da lugar a una manifestación visible
¿Cuáles son las pruebas serológicas secundarias?
- Prueba de precipitación
- Prueba de aglutinación
¿En qué se basa la prueba de precipitación?
Miden la cantidad de antígeno o anticuerpo en los líquidos corporales a partir del grado de precipitación visible de complejos antígeno-anticuerpo dentro de un gel de agarosa o en solución
¿Cuándo se produce la precipitación en la prueba?
Cuando la concentración de antígeno y anticuerpo es óptima
¿En qué se basa la prueba de aglutinación?
Las moléculas de anticuerpos se acoplan con los grupos antigénicos de las partículas del antígeno y actúan como puentes produciendo grumos visibles
¿Cuáles son las pruebas serológicas primarias?
Aquellas en las cuales requieren de otro procedimiento para visualizar la reacción antígeno-anticuerpo
¿Cuáles son las pruebas serológicas primarias?
- Fijación del complemento
- Inmunofluorescencia
- Radioinmunoensayo
- Pruebas inmunoenzimáticas (ELISA)
- Inmunoelectrotransferencia (Western blot)
- Inmunocromatografía
¿Cuál es el fundamento de la prueba de fijación del complemento?
Utilización de una cantidad precisa de complemento sérico, la cual se utiliza de manera total en presencia de la reacción de un antígeno con su anticuerpo
¿Cuál es el sistema indicador para saber si el complemento ha sido utilizado en la fijación del complemento?
La hemólisis de los glóbulos rojos en presencia del complemento
Si en una prueba de fijación del complemento no ocurre hemólisis, ¿de qué nos estaría hablando?
Qué si hubo una reacción antígeno-anticuerpo la cual utilizó el complemento y por ello no queda complemento disponible para la hemólisis de los glóbulos rojos
¿En qué se basa la inmunofluorescencia?
Se marca un anticuerpo con un compuesto fluorescente que al fijarse específicamente al antígeno se verá fluorescente
¿Cuál es la interpretación de la presencia o ausencia de fluorescencia en una prueba de inmunofluorescencia?
- Presencia de fluorescencia cuando ocurre la reacción antígeno anticuerpo
- Ausencia de fluorescencia cuando el anticuerpo no se fija al antígeno
¿En qué se basa la ELISA?
En la detección de antígenos o anticuerpos por medio de anticuerpos acoplados a una enzima y la utilización de un sustrato cromogénico
Menciona las diferencias entre la ELISA directa, indirecta y sándwich
- Directa: Busca detectar antígenos, se usa un anticuerpo primario ligado a una enzima que detecta directamente el antígeno
- Indirecta: Busca detectar anticuerpos, se utiliza un anticuerpo secundario ligado a una enzima que detecta al anticuerpo primario el cúal se une al antígeno
- Sándwich: Busca detectar antígenos, emplea dos anticuerpos que se unen a diferentes epítopos del antígeno, el anticuerpo ligado a la enzima se une al antígeno que previamente se unió a un anticuerpo de captura
¿Cómo se expresan los resultados de una ELISA?
Se expresa en valores cualitativos, es decir positivo y negativo pero también se toma en cuenta la intensidad de la señal (colorimetría) la cual es directamente proporcional a la cantidad del antígeno capturado
¿En qué consiste el radioinmunoensayo?
Un antígeno objetivo se marca radiactivamente y se una a sus anticuerpos específicos
Ocurre una competencia entre antígenos marcados y antígenos no marcados (no marcados son los que están presentes en la muestra del paciente) por los sitios de unión a los anticuerpos
¿Qué se necesita para que haya radioactividad en el radioinmunoensayo?
Que el antígeno marcado radiactivamente se una al sitio de unión de un anticuerpo
¿Qué significa una alta radioactividad en el inmunoensayo?
Indica que hay una alta cantidad de antígeno marcado y por lo tanto menor cantidad de antígeno del paciente
¿Qué significa una baja radioactividad en el inmunoensayo?
Que hay una gran cantidad de antígenos del paciente, los cuales se unieron a los anticuerpos e impidieron que los antígenos marcados se unieran
¿Qué es lo que detecta la prueba molecular Western Blot?
Proteínas
¿En qué consiste el Western blot?
En la detección de proteínas por medio de anticuerpos monoclonales, donde la unión del anticuerpo se detecta usando un marcador radioactivo o químico
¿Cuáles son los pasos del Western blot?
- Preparación de la muestra
- Electroforesis en donde se separan las proteínas
- Transferencia de las proteínas separadas a una membrana
- Bloqueo
- Incubación del anticuerpo marcado, anticuerpo se pega a proteína específica
- Detección, se detecta unión por actividad enzimática o fluorescencia
¿Cómo funciona la inmunocromatografía?
Hay una migración de una muestra a través de una membrana de nitrocelulosa, esta prueba permite visualizar la reacción antígeno-anticuerpo por acumulación del oro coloidal del conjugado en zonas específicas del papel donde se fijan previamente anticuerpos de captura
¿Cuál es el proceso de la inmunocromatografía?
- Muestra se coloca en la membrana y esta migra a lo largo de la misma
- Antígenos se unen a anticuerpos marcados con oro coloidal
- Conjugado o complejo antígeno-anticuerpo se unen a los anticuerpos de captura
- La unión marca la línea de resultado positivo en la prueba
¿Qué nos puede llevar a tener un falso negativo en una prueba molecular?
- Muestra insuficiente
- Fase temprana de la enfermedad
- Acción de ADNasas o ARNasas
¿Qué nos puede llevar a tener un falso positivo en una prueba molecular?
- Contaminación de muestra
- Combinación de muestras
Modificaciones postraduccionales que pueden hacerse con Western Blot
- Acetilación
- Fosforilación
- Citrulinación
¿Cuáles son los tipo de ELISA más específico y porqué?
ELISA sándwich porque contienen 2 anticuerpos que se unen a dos diferentes epítopos de un mismo antígeno
