5.5 Fundamentos de PCR cuantitaiva en timpo real

Question 1

Quien y en que año creo la PCR

Answer 1

Kart Mullís en 1983

Question 2

Principios básicos de la PCR

Answer 2

Principio de complementariedad
En dirección 5’->3’ con este último extremo libre

Question 3

Etapas de la PCR

Answer 3

Desnaturalización
Replicacion
Elongacion

Question 4

Componentes esenciales para la PCR

Answer 4

ADN
Primers
DNA pol
dNTPs
Magnesio

Question 5

Que son los dNTPs

Answer 5

Desoxinucleotidos libres, trofosfatados que ayudan a formar enlaces fosfosiester
Con concentración de 50-200mM -> para sintetizar 6.5-25mg de ADN

Question 6

Resumen del proceso de de PCR

Answer 6

1. Inicio del proceso de desnaturalización a 95º por 5 min
2. Realiza ciclos de amplificación desnaturalizando a 95º por 30s, alineamiento de a 50-60º de 30-40s y extension a 72º
3. Amplificación final a 72º de 1-2 min
4. Almacenamiento temporal a 4º

Question 7

Tipos principales de PCR

Answer 7

PCR
convencional
cualitativo
semicuantitativo
cuantitativo
multiple

Question 8

Características de PCR convencional

Answer 8

Amplificación de una región genética especifica
Uso de gel de agarosa

Question 9

Características de PCR cualitativa

Answer 9

Permite identificar presencia o ausencia de un fragmento especifico
Dx de enfermedades infecciosas

Question 10

Características de PCR semicuantitativa

Answer 10

Permite conocer los niveles de expresión de un gen
ARNm

Question 11

Características de PCR cuantitativa

Answer 11

Mide cantidad de microorganismos en ARN de un gen en particular
Usa de referencia curva con muestras con concentraciones conocidas

Question 12

Características de PCR múltiple

Answer 12

Amplificación de varias regiones técnicas en una misma reacción de PCR
Cada region cuenta con sus pares de oligos

Question 13

Quien y en que año creo la PCR en tiempo real

Answer 13

Higuchi en 1992

Question 14

Característica principal de la PCR en tiempo real

Answer 14

Puede analizar varias secuencias simultáneamente

Question 15

Reporteros de PCR tiempo real

Answer 15

2 fluoroforos: VIC y FAM

Question 16

Quien absorbe la fluorescencia del reportero

Answer 16

EL aprobador, siempre esta cerca del anterior

Question 17

Tipos de detección de PCR en tiempo real

Answer 17

Mediante fluorescencia
- SYBER green: fluoroforo intercalante de DNA
- Taq Man: VIC y FAM, con apagado por cercano

Question 18

Ventajas de PCR en tiempo real

Answer 18

Calculo de eficiencia de reacción
Nop es necesario el gel de agarosa
Mayor rapidez y eficiencia

Question 19

Aplicaciones de PCR en tiempo real

Answer 19

• Análisis de expresión para cancer
• Investigación: detección a polimorfismos asociados a a enfermedades (caso-control)
• Dx de enfermedades (covid)