Chapitre 6 - Observations des microorganismes

Question 1

Robert Hooke

Answer 1

• Microscopes composés
• terme “cellule”

Question 2

Antoni Van Leeuwenhoek

Answer 2

• lentilles bonnes qualité (300x)
• Animalicules

Question 3

Unités et échelles de grandeur

Answer 3

Micromètre (um) et nanomètre (nm)

Question 4

Longueur d’onde

Answer 4

• Lumière blanche contient toutes les couleurs de la lumière visible

Question 5

Interactions de la lumière avec un objet

Answer 5

• Réflexion
• Absorption
• Transmission
• Diffraction

Question 6

Réflexion

Answer 6

Onde rebondit, donne la couleur

Question 7

Absorption

Answer 7

Énergie gardée par l’objet, lumière émise de nouveau (fluorescence)

Question 8

Transmission

Answer 8

Passage de la lumière à travers des objets

Question 9

Diffraction

Answer 9

• Déviation ou courbure des rayons lumineux lors de leur passage à travers une ouverture de petite taille
• Problème en microscopie ! Les lentilles créent un tel effet, le grossissement maximal associé à une lentille est de 100X

Question 10

Réfraction

Answer 10

• Changement d’angle de la lumière en fct de la densité
• indice de réfraction
• diminution du diamètre de la lentille
• problème en microscopie – solution: utilisation de l’huile à immersion qui possède le meme indice que le verre

Question 11

Résolution

Answer 11

-Capacité d’une lentille à présenter les objets distinctivement, sans chevauchement
- lié à la longueur d’onde de la lumière
- ouverture numérique d’une lentille

Question 12

Concept de grossissement

Answer 12

• grossissement total d’un spécimen observé est déterminé en multipliant le grossissement des oculaires par celui de l’objectif
• grossissement des oculaires = 10x

Question 13

Types de microscopes

Answer 13

• Optique: énergie du spectre lumineux et des lentilles
• Électronique: Faisceau d’électrons et des électroaimants
• À sonde: Utilise le principe du Braille à l’aide d’une sonde et d’un signal électriqee

Question 14

Microscope à fond clair

Answer 14

• Échantillon plus foncé sur fond brillant
• Spécimens frais et contrastés ou morts et colorés
• grossissement max de 1000-2000x

Question 15

Microscope à fond noir

Answer 15

• Observation de microorganismes vivants (observer mouvements, impo à colorer)
• Condenseur modifié avec disque opaque (bloquer partie rayonnement lumineux
• spécimen brillant sur fond noir

Question 16

Microscope à contraste de phase

Answer 16

• observation des structures internes d’organismes vivants (n-fixés, n-colorés)
• Augmente le contraste entre des structures d’épaisseurs variables
• Spécimen avec régions brillantes à noir en passant par le gris

Question 17

Microscope à fluorescence

Answer 17

-fluorochrome: absorbe lumière UV et émettre de la lumière visible
-filtre d’excitation: retient la lumière visible et laisse passer les rayons UV qui exciteront les fluorochromes sur le spécimen à observer
-Spécimen: échantillon
-filtre d’émission: retient les rayons UV et laisse passer lumière visible

Question 18

Immunofluorescence?

Answer 18

-Utilisation d’anticorps associés à des fluorochromes
- technique très spécifique (protéine spécifique, microo spécifique)

Question 19

Microscope électronique

Answer 19

-Idéal pour visualiser spécimen de moins de 0,2um
- non-vivants, longue préparation
- pas de source lumineuse (Faisceau d’é)
- pas de lentilles de verre (électroaimants)

Question 20

Microscope électronique à balayage (SEM)

Answer 20

• images tridimensionnelles des surfaces
• électrons du spécimen sont renvoyés vers un capteur
• grossissement jusqu’à 10 000x

Question 21

Microscopie électronique à transmission (TEM)

Answer 21

• Observation d’échantillons très minces
• Électrons passent à travers le spécimen puis atteignent le détecteur
• grossissement 100 000x

Question 22

Microscope à force atomique

Answer 22

• principe de braille avec une sonde se déplaçant à la surface de l’échantillon (pas lumière ni électrons)
• mesure topographie des objets et construit image
• utilisable en fct du temps et sur du matériel vivant
• grossissement jusqu’à 100 000 000x

Question 23

Préparation des échantillons (microscope optique)

Answer 23

• Montage frais (liquide): Technique simple, goutte suspendue
• Montage fixe (séché et coloré): séchage à l’air, fixation à chaud, coloration

Question 24

Colorants

Answer 24

• Colorants acides
• Colorants basiques

Question 25

Colorants basiques (sels d’ions +)

Answer 25

Ion + est attiré par la bactérie ayant une charge globale -

Question 26

Colorants acides (sels d’ions négatifs)

Answer 26

• Coloration des structures “positives” ou de l’arrière plan (coloration négative)

Question 27

Types de coloration

Answer 27

• Simple: basique, morphologie, taille et arrangement
• Différentielle: plusieurs colorants, caractéristiques distinctes
• Structures spécifiques: Coloration endospore, capsule, flagelles

Question 28

Coloration de gram (différentielle)

Answer 28

Démontre les différences au niveau de la paroi cellulaire

Question 29

Couleur gram+/gram-

Answer 29

• gram+ = violet
• gram - = rose

Question 30

alcool chez gram-?

Answer 30

-Passe à travers la membrane, va déloger le cristal violet, donc devient transparente/translucide
- ajouter safranine (devient rose)

Question 31

Coloration acido-alcoolo résistance

Answer 31

coloration différentielle (fortes liaisons du colorant aux parois riches en lipides)
1- tout le monde est rouge
2- perd coloration
3- rinçage à l’eau

Question 32

Coloration des endospores

Answer 32

• Difficile pour les colorants de passer la paroi sporale
• Coloration de Shaeffer-Fulton

Question 33

Coloration de Shaeffer-Fulton

Answer 33

• Frottis fixé
• vert de malachite
• lavage à l’eau
• Contre coloration à la safranine
• dernier lavage à l’eau
• endospore = vert
• cellules végétative = rouge

Question 34

Coloration négative des capsules

Answer 34

• Utilisation de l’encre de chine ou de nigrosine (colore fond de la lame, coloration simple)

Question 35

Coloration des flagelles

Answer 35

• Procédé complexe
• Utilisation de mordant pour rendre les flagelles plus épais puis ajout d’un colorant basique