ELISA & CITOMETRÍA DE FLUJO

Question 1

Regiones de un anticuerpo

Answer 1

• Región variable: unión de los antígenos (los reconoce)
• Región constante (siempre está)
• Cadena pesada
• Cadena ligera

Question 2

¿Qué es un epítope?

Answer 2

Región del antígeno que reconoce al anticuerpo

Question 3

¿Qué es un anticuerpo monoclonar?

Answer 3

Son la copia exacta de un único tipo de anticuerpo (detecta un antígeno específico)
* linfocito B + cx. mieloma = hibridoma

Question 4

¿Qué significa ELISA?

Answer 4

Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas
Función: nos ayuda a cuantificar la presencia de antígenos y anticuerpos

Question 5

Características ELISA DIRECTA

Answer 5

antígeno se inmoviliza + anticuerpo primario marcado con una enzima para detectar antígeno

Eg: prueba de embarazo

Question 6

Características ELISA INDIRECTA

Answer 6

antígeno se inmoviliza + Ac primario sin marcar se une al antígeno + Ac secundario marcado con una enzima que se une al Ac primario

Question 7

Características ELISA tipo sandwich DIRECTA

Answer 7

Anticuerpo se inmoviliza + antígeno + Ac primario de detección se une al antígeno

Question 8

Características ELISA tipo sandwich INDIRECTA

Answer 8

Anticuerpo se inmoviliza + antígeno + Ac primario de detección se une al antígeno + Ac secundario marcado se une al Ac de detección

Question 9

Función de la citometría de flujo

Answer 9

Técnica de análisis que permite identificar diferentes poblaciones celulares simultaneamente

Question 10

¿Qué son los clúster de diferenciación?

Answer 10

• Son proteínas que se encuentran en la superficie cx.
• Cada molécula CD puede ser específica para una cx. o linaje cx. (ayuda a diferenciar a las cx.)

Question 11

Pasos citometría de flujo

Answer 11

1→Cx. se encuentran en un buffer de fosfatos y son alineadas en fila india
2→ Un sistema óptica (láser) ilumina las cx.
conocer tamaño
identificar los clúster de diferenciación
3→La señal luminosa se traduce en señales electrónicas

Question 12

¿Cuándo podemos utilizar la citometría de flujo para un diagnóstico?

Answer 12

• Diagnóstico de leucemia y linfomas
• Seguimiento de enfermedades
  (VIH)
• Estudios de cáncer
• Cuantificación de concetración de moléculas solubles
• Tratamiento antitumorales e inmunosupresores

Question 13

SOUTHERN BLOT

Answer 13

Detectar secuencia de ADN

Question 14

NORTHERN BLOT

Answer 14

Detectar secuencia de ARN

Question 15

WESTERN BLOT

Answer 15

Detectar secuencia de proteínas

Question 16

Pasos para hacer un Southern blot

Answer 16

1. Aíslar en ADN
2. Enzimas de restricción cortan el ADN para que sean separados mediante electroforesis.
3. Electroforesis
4. Desnaturalizar ADN
5. Papel filtro de nitrocelulosa
   (gel→superficie de una membrana)
6. La membrana se expone a una sonda de ADN marcada. Si la sonda se une a la membrana, entonces la secuencia de la sonda está presente en la muestra

sonda→secuencia de nt específica (antígeno)