Enzimas Flashcards
Enzimas
Proteínas de elevado peso moléculas que tienen actividad catalítica
Enzimas Plasmáticas
Se encuentran dentro de las células (componentes intracelulares asiciados a membrana, en el citosol, en orgánulos…)
·SECRECIÓN. Sin embargo, algunas realizan funciones fisiológicas fuera de las células en la sangre por lo que son secretadas. (hemostasia por la plasmiana, LCAT para el metabolismo de lipoproteinas)
·Otras salen a la sangre por el proceso de RECAMBIO CELULAR pero siempre se mantienen en una concentración pequeña respecto al contenido intracelular. (cáncer) no hay balance entre proliferacion y muerte celular.
·Hay veces que las enzimas aparecen en el plasma por una lesión al tejido (NECROSIS) que las contenía originalmente (ALT en el higado, CK músculo). Esto proporciona info sobre la procedencia de la lesión y del grado de lesión. Si estan en orgánulos la lesión tiene que ser muy grande pero si estan el la membrana o citosol rapidamente.
·OBSTRUCCIÓN de secreción a ecm que acaba saliendo al torrente. (Páncreas)
·INDUCCIÓN de síntesis enzimática. Tanta que sale un poco. (γ-GT inducida por farmacos o alcohol)
·No suficiente ELIMINACIÓN/ DEGRADACION
Actividad Enzimática Sérica
La modificacion del nivel de actividad de las enzimas séricas depende de:
·Velocidad de llegada a la circulación (vascularización de herida)
·Estabilidad de su actividad (inhibidas vs mantenidas)
·Velocidad de eliminación (vida media)
Isoenzimas
Moléculas distintas con la misma actividad:
- amilasa salivar vs pancreática
- creatin kinasa 3 versiones
- fosfatasa alcalina osea, renal, alcalina…
- lactato deshidrogenasa 5 distintas
Para saber cual es cual podemos hacer electroforesis o método inmunoquímicos
Determinación de la Actividad Enzimática
Hay factores 3 factores que hay que tener en cuenta: los preanalíticos, los de actividad enzimática y los de unidad de medida
Factores pre-analíticos para la determinación enzimática
·Edad
·Sexo
·Ejercicio
·Momento de obtención de las Muestras
Actividad enzimática para determinación de la actividad enzimática
·Concentración ·Tipo y concentración de sustrato ·Temperatura ·pH ·Cofactores o inhibidores
Unidad de medida para la determinación de la actividad enzimática
Unidades del sistema internacional:
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
·Katal: moles de sustrato que se transforman por segundo. Número muy grandes
·Ul: µmoles de sustrato que se transforman por minuto. Mayor utilidad
CONCENCTRACIÓN CATALÍTICA
·Katal/L
·UI/L
1µkat/L = 60 UI/L
Enzimas hepáticas
Aminotransferasas
γ-Glutamiltranferasa (γ-GT)
Fosfatasa Alcalina
Lactato Deshidrogenasa
Aminotransferasas
Tambien llamada transaminasa
Catalizan la transferencia reversible de un amino acido desde un a-aa a un a-cetoácido (piridoxal fosfato cofactor Vit B6) en el metabolismo de los aa y en la gluconeogénesis.
ASL (aspartato+ a-cetoglutatato = glutamato+oxalacetato)
ALT (piruvato + glumato = alanina + a-cetoglutarato)
La determinación de los dos suele ser simultanea. Las dos estan en el hígado en grandes cantidades pero la ALT predomina ya que es la más específica del hígado. La AST tambien se encuentra y muy activa en el hígado pero es muy activa en muchos órgans.
Vidas medias:
AST: citosol=17h mitocond=87h
puede formar complejo con IgG y así activa su actividad sérica.
ALT: 45h
Alteraciones en Aminotransferasas
ALTERACIONES HEPÁTICAS
Sus actividades aumentan en el suero por la liberación desde células lesionadas o necrosadas.
·Enfermedad inflamatoria Hepática (causas víricas o alcoholicas) se produce elevación de ALT y AST 10 veces más alta que el límite de referencia. La elevacion de ALT es más alta y más duradera por su mayor vida media 45h) si esta esta levada más de 6 meses se denomina cronificación.
·Cirrosis hepática/ hepatocarcinoma:
Elevacion de ambas pero más de AST.
·Colestasis Extrahepática:
Coexiste una elevación de fosfata alcalina y alteración de la bilis.
OTRAS ALTERACIONES
·Infarto Agudo de Miocardio
AST ++ mientras que ALT + o normal
·Ingesta de fármacos opiaceos, estatina, antiepilépticos o mismamente ibuprofeno o paracetamol aumenta el nivel de transaminasas en la sangre
Determinación Analítica de Transaminasas / Aminotransferasas
Reacciones acopladas en las que se monitoriza con técnicas de espectofotometría el descenso de NADH, que es proporcional a la concentración de aminotranferasas ALT y AST.
Con AST se puede usar para determinar tambien la concentracion de malato-deshidrogenasa y con ALT la concentraicón de LDH
Valores de referencia para transaminasas / aminotranferasas
AST
H: 37 U/L M: 31 U/L
ALT
H: 41 U/L M: 31 U/L
γ-Glutamiltransferasa (γ-GT)
Enzima que cataliza la transferencia de γ-glutamilo a peptidos y aa
Se localiza en muchos tejidos: Hígado rinnnñon, pancreas e intestino. Pero sobre todo en los microsomas de células de el conducto biliar y sus membranas plasmáticas
Aumento de γ-Glutamiltransferasa
Aumenta en el suero debido a lateraciones biliares y hepáticas.
Por eso es un gran marcador para enfermedades como:
·Colestasis (más que la fosfata alcalina), 30 veces por encima de su valor
·Consumo habitual de alcohol. Los valores disminuyen un 50% después de 2 semanas sin beber y al basal 6-8 semanas después.
·Diabetes Mellitus, Infarto de Miocardio y Pancreatitis
·Tratemientos farmacológicos
Determinacion Analítica de γ-Glutamiltransferasa
Ya que su actividad disminuye tras la ingesta, es recomendable que la ingesta se realice en ayunas.
La determinación se hace con una reacción. La velocidad de esa reacción es proporcional a la concentracion de γ-Glutamiltransferasa. Se mide espectrofotometrica
Valores de referencia de γ-Glutamiltransferasa
A 37º
H:50 U/L
M:32 U/L
Fosfatasa Alcalina
Es un grupo de metaloenzimas de membrana con Zn que hidrolizan ésteres de fosfato en pH alcalino usando Mg como cofactor.
Presente en muchos tejidos pero sobre todo en sinusoides y canalículos biliares. Tambien en los huesos, epitelio intestinal, placenta y bazo.
Elevacion de Fosfatasa Alcalina
·Elevada actividad osteoblastica: fracturas,
hiperparatiroidismo, déficit de Vit D, enfermedad de Paget;
metástasis óseas. No en osteoporosis ni mieloma ya que no estan acompañadas de actividad osteoblástica (sintetizar hueso)
·Alteraciones del árbol biliar o colestasis intra o extrahepática ya que se estimula su sintesis.
Determinación de Fosfatasa Alcalina
Tiene baja especificidad. No se puede distinguir bien si viene del hígado intestino… por lo que se necesita hacer una determinación combinada
En pH alcalino una reaccion que se mide el producto con espectrofotometría. Importante no usar EDTA ya que es un quelante de Calcio ya que se esta empleando Mg.
Tampoco se puede usar un espécimen hemolizado ya que hay enzima dentro. Tampoco tras una comida, debe de ser en ayunas ya que las didetas ricas en grasa la aumentan.
Se pueden diferenciar las distintantas isoenzimas por técnicas de electroforesis: (más lejos) Hepática Osea (solapamiento con hepá) Placenta Intestinal
Si queremos más separación podemos usar lectina con calor. Se bloquea la osea y se diferencia la hepática. Para obtener la osea restamos.
