Histologie Flashcards
(25 cards)
Vorteile von PFA
Pulver - einfach zu lagern, durch Erhitzung in Wasser -> Depolymerisierung zu Formaldehydlösung
Keine Stabilisatoren benötigt (Ethanol, Methanol)
Besser für Feinstruktur, weniger starke Denaturierung als zbsp Formalin (Erhaltung der Antigenstruktur)
Substanzflucht
Lösliche Möleküle weichen durch Diffusion aus dem Gewebe. Grund dafür:
Fixierungsmittel wirkt zu langsam, nicht ausreichend zugegeben, dringt nicht in tiefere Gewebeschichten ein.
Durch den Verlust, werden Zellstrukturen verfälscht dargestellt.
Was ist Endpunkt Färbung
Färbetechnik bei der die Farbintensität bis zum Maximum gesteigert wird.
Gut, um spezifische Strukturen sichtbar zu machen.
Was ist der IP
Je geringer der pH Wert, desto mehr Ionen…
= isoelektrischer Punkt = jene Ionenkonzentration (jener pH Wert) bei der das Protein ungeladen.
IP im ZK geringer als im Milleu (positiv geladene Histone…)
-> wenn pH < Ip -> Molekül positiv geladen -> reagiert mit sauren Farbstoffen
-> wenn pH > Ip -> Molekül negativ geladen -> reagiert mit basischen Farbstoffen
Wie funktioniert die elektrostatische Färbung?
Nutzt unterschiedlichen IP von zbsp ZK und Cytoplasma.
1. Pufferlösung mit pH- Wert: 4,5 zugeben.
-> Zk (IP:3) -> wird negativ
-> Cytoplasma (6,5) -> wird positiv
- jetzt können 2 unterschiedl. geladene Farbstoffe dazugegeben werden
Wie funktioniert die HE- Färbung
Hämatoxylin (positiv geladen) färbt den ZK (-) = blau
Eosin (negativ geladen) das Cytoplasma (+) = rot
Was ist ein Intermedium
Wird verwendet um Reste von Wasser aus dem Präparat zu bekommen, um es anschließend einbetten zu können. Zbsp Ethanol.
Was ist die HAT Medium Selektion
Spielt eine Rolle bei der Herstellung monoklonaler AK.
Wird verwendet um Myelomzellen von Myelom- B Zell; bzw Mylom- Milszellen zu sepparieren.
Man nutz den Enzymdeffekt, der verwendeten Myelomzellen aus. -> keine alternative Purinsynthese…
-> nur mehr B- Lympho- Myelomzellen und Mils- Myelomzellen übrig
Nenne Kernfärbungen
Kernechtrot, Fuchsin, Hämotoxylin, Safranin
Erkläre das Prinzip der Einbettung
Gewebe wird mit flüssigem Einbettungsmedium (Parafin), welches bei Raumtemperatur fest wird, übergossen.
Schritte:
1. Fixieren
2. Auswaschen
3. Intermedium
4. Einbettung
5. Auskühlen
6. Schneiden
7. Färben
In Situ Hybridisierung
Gen Sequenz muss bekannt sein,
Methode um örtliche und zeitliche Proteinaktivität zu bestimmen
-> DNA/ RNA Sonde (=antisense Strang) mit Marker (insg ca 800 Basen) in Gewebe bringen….
Nenne FIxative
Paraformaldehyd
Formalin
Alkohol
Pikrinsäure
Osmiumtetroxid - Lipide
Aceton
Glutardialdehyd
Trichloressigsäure
Uranylacetat
Färbemethoden
Progressive Färbung: Farbstoff wird immer intensiver
Regressive Färbung: Präparat wird maximal gefärbt, anschließend ausgewaschen
Endpunktfärbung: Farbstoff färbt bis 100% gesättigt
Imprägnierung: Anfärbung mit Metallsalzen
Succedanfärbung: hintereinander zufügen der untersch Farbstoffe
Simultanfärbung: Farbstoffe werden gleichzeitig zugegeben
Was ist die Trichromfärbung?
Färbung mit Eisenhämatodylin, Pikrinsäure und Säurefuchsin
Schwarz: ZK
Rot: Cytoplasma, Knochen u Knorpel
Gelb: Muskulatur
Was ist eine Azan Färbung
Färbemethode zum unterschiedlichen Anfärben von Knorpeln, Knochen und Muskeln aber auch ZK und Erythrozyten.
Wie lassen sich Muskeln anfärben?
Mit Phalloidin, Gift aus dem Knollenblätterpilz.
Phalloidin (wird mit fluoreszenz markiertem AK hybridisiert) hat die Eigenschaft an Aktin zu binden…
Aufbau von einem AK
4 AS Ketten- 2hc (446AS)+ 2 lc (214AS) über Schwefelbrücken verbunden
Fc und Fv
Antigenbindestelle x2
Woher kommt die Variabilität in den AK.
Im Genom kommen 250 v- Regionen und 5 joining Regionen, aus welchen sich der variable Teil des AK zusammensetzt -> hohe Variabilität+ Rekombination!
Ausßerdem kann eine Transferase an der hc zufällig Basen anhängen
Benötigte Komponenten für PAP
= indirekte Färbemethode, man nutzt einen Peroxidase- Anti Peroxidasekomplex.
Meerrettichperoxidase + alkalische Phosphatase
Perfusionsfixierung/ Immersionsfixierung?
Perfusionsfixierung: Fixatix wird durch die Blutgefäße in die Zellen gepumpt
Imemrsionsfixierung: Präparat wird in Fixativ eingelegt
Zähle Einbettungen auf
Paraffin
Celloidin
Gelatine
Agar
Polyäthylenglycol
Metacrylat
Epoxidharze
Unterschied chromophore und auxochrome Gruppen?
Chromophore Gruppe= Moleküle, welche Licht in bestimmtem Wellenlängenbereich absorbieren, dadurch farbgebend.
Auxochrome Gruppe= beeinflussen Färbeeigenschaft eines Chromophors, verschieben Absorptionsmaxima.
Was versteh man unter Kreuzreaktion
AK bindet ungewünschtes Antigen mit strukturähnlichem Epitop
Warum ist AK Titer nicht gleich AK Konzentration
Weil AK mit hoher Affinität, eine gereingere Konzentration brauchen…
