Hoofdstuk 1 Flashcards
(26 cards)
hoe verloopt celcultivering
- cellen worden uit een weefsel geisoleerd
- cellen worden in een medium gebracht = primaire cultuur
- de cellen delen en vormen een monolaag
- de primaire cultuur gaat over in een secundaire
verschil primaire en secundaire cultuur
primair: cellen rechtstreeks uit het weefsel, delen nog
secundair: komen van de primaire cultuur en zijn door ‘immortalisatie’ onsterfelijk….de cellijn is nu stabiel
types celculturen
- monolaag
- kolonie
MEM
minimaal essentieel medium
- serum
- isotone zouten
- energie; glucose
- vitamines, aminozuren
in wat voor condities moet een celcultuur kunnen groeien en waarom
in een 5% CO2 omgeving
om pH van 7,4 te bereiken
groeisubstraat + doel
- van plastic of glas
- kan nog gecoat zijn
- zorgt voor een adherente celcultuur
- voorkomt apoptose/anoikis
- fungeert ntrlk als fysische drager
hoe kunnen kankercellen groeien in een medium
in 3D, dus niet gewoon een monolaag
hoe werkt celtransfer
- bij adherente cellen is er eerst een confluente monolaag nodig
- dan toevoeging trypsine en EDTA
- trypsine verknipt celadhesiemoleculen
- EDTA capteet calcium
- cellen komen van elkaar en substraat los
- worden dan verdund en aan een nieuw substraat toegevoegd
adherente celcultuur
cellen hangen aan elkaar en aan het medium
wat is een stamcel
- kan zich voortdurend delen
- kan nog differentiëren tot verschillende celtypes
soorten stamcellen
- totipotent: cel kan een volledig mens worden
- pluripotent: kan geen volledig mens worden maar wel alle weefseltypen
- multipotent: kan alleen alle celtypen worden binnen een bepaald weefsel
hoe kan je een cellijn bewaren
invriezen
iPSC
- geïnduceerde stamcellen
-somatische cellen worden afgenomen en in cultuur gebracht - dedifferentiatie tot stamcel
probleem bij stamcellen
cellen groeien cel in goed groeimedium
- contaminatie met micro organismen; antibiotica resistente mycoplasmas)
- contaminatie met vreemde cellen
hoe kan je de genetische zuiverheid van een cellijn dan controleren
- karyotypering
wat kan je doen wanneer de cellijn genetisch gezien instabiel wordt
- stock cultures gebruiken
- ingevroren bewaard
wat is een stock culture
- voorraad aan ingevroren cellen (waarmee je experimenteert)
- je kan ze gebruiken als je cellen genetisch geinstabiliseerd zijn waardoor je geen nieuwe moet kweken of isoleren
preparen van weefsels
1) fixeren
2) inbedden
3) snijden
doel prepareren
weefsels observeerbaar maken voor EM of LM door
- dunne coupes te maken waar licht of elektronen door kunnen
- weefsels contrasteren door achteraf te kleuren
resolutie van een lichtmicroscoop en waardoor wordt die bepaald
- 200 nm
- door objectief en golflengte vh licht
- natuur vh preparaat; gefixeerd of levend (contrast)
hoe krijg je contrast bij een LM
klaverveld: gekleurd preparaat: obv lichtabsorptie
fase contrast: niet gekleurd, levend preparaat: obv verschillen in dichtheid ondergaat het invallend licht een faseverschuiving, je krijgt een zwart wit beeld
hoe verloopt de kleuring bij een coupe
- eerst deparaffineren met tolueen
- dan alcoholreeks in omgekeerde richting
- dan kleuring
kleurtechnieken bij LM
- HE
- immunohistochemie
- enzymkleuring
- oil red
welke technieken kunnen bij fluorescentiemicroscopie gebruikt worden
- immunofluorescentie
- tagging
- ion gevoelige fluorochromen
