Immunotechniques

Question 1

Comment fonctionne un test d’hémagglutination?

Answer 1

• C’est une technique basée sur l’agglutination (regroupement) des globules rouges en présence d’anticorps spécifiques.
• Utilisé pour déterminer les groupes sanguins ou détecter des anticorps dans un sérum.
• Ex : Si l’on mélange des globules rouges avec un sérum contenant des anticorps dirigés contre eux, ils vont s’agglutiner.

Question 2

Comment fonctionne le principe d’immunobuvardage?

Answer 2

• Technique d’identification d’une protéine sur un gel SDS.
• Séparation des protéines par électrophorèse, transfert sur une membrane, utilisation d’anticorps spécifiques pour détecter une ou plusieurs protéines d’intérêt.
• Un anticorps secondaire couplés à une enzyme ou un marqueur révèle la présence de la protéine ciblée.

Question 3

Comment fonctionne un RIA (radio immunoassay)?

Answer 3

• Technique pour quantifier des protéines
• Dans une série de tubes, on incube l’anticorps avec une quantité fixe de l’antigène radiomarqué et des quantités croissantes de l’antigène non-marqué. Celui-ci est en compétition avec l’antigène marqué.
• Pour l’échantillon, seulement à faire une réaction de compétition avec l’antigène radiomarqué, le degré de compétition indique la quantité.
• Besoin de : Anticorps spécifique pour l’antigène fixé à une substrat solide (lavages), antigène pur et radiomarqué, antigène pur et non-marqué en quantité connue (référence), échantillon à analyser.

Question 4

Comment fonctionne un ELISA (enzyme-linked immunoadsorbant assay)?

Answer 4

• Couplage d’un enzyme à l’anticorps.
• Test en microplaque utilisant des anticorps et une enzyme qui produit un signal (souvent coloré) si la cible est présente.
• On fixe un antigène ou un anticorps sur une plaque, puis on détecte la présence d’un anticorps ou antigène spécifique à l’aide d’un anticorps couplé à une enzyme.
• Plus le signal est fort (coloration), plus il y a de cible dans l’échantillon.

Question 5

Qu’est-ce que l’immunofluorescence?

Answer 5

• L’immunofluorescence est une approche qui ajoute une mol. colorée (chromophore) et une mol. fluorescente (fluorochrome) à un anticorps.
• La fluorescence est l’absorption d’un photon d’une certaine longueur d’onde et la réémission d’un photon d’une longueur d’onde plus longue (- énergétique).

Question 6

Quel est le principe du FACS (fluorescence-activated cell sorting)?

Answer 6

• Le FACS est une machine qui tri des cellules marquées par fluorescence, selon les protéines qu’elles expriment.
• Chaque cellule passe devant un laser, et la fluorescence est mesurée. Permet d’isoler des sous-populations cellulaires.

Question 7

Qu’est-ce que la technique de l’immunoprécipitation?

Answer 7

• Utilisation d’un anticorps pour extraire une protéine spécifique d’un mélange.
• Formation d’un complexe anticorps-protéine qui précipite à l’aide de billes magnétiques ou de protéines A/G.
• Permet d’ensuite analyser cette protéine (ou ses partenaires) par immunobuvardage ou autre technique.

Question 8

Comment fonctionnent les “dip-sticks”?

Answer 8

• Tests simples et portables qui utilisent des anticorps fixés sur une bandelette.
• Quand l’échantillon (urine, salive) passe le long de la bande, il rencontre des anticorps qui reconnaissent la cible (ex : hCG pour grossesse, antigène viral pour Covid). Si la cible est présente, une bande colorée apparaît en plus de la bande témoin.
• Exemples : Test de grossesse, test rapide Covid