Technologies De L’ADN Flashcards
De quoi dépendent les technologies de l’ADN?
De notre capacité à manipuler l’ADN (nos connaissances acquises en recherche fondamentale applicables à des domaines utiles en santé humaine)
Qu’est-ce qu’une nuclease?
Enzyme qui clive les liaisons phosphodiester entre les nucleotides des brins d’acides nucléiques
Quelles sont les 2 types de nucleases?
Exonuclease: coupe les acides nucléiques, un nucleotide à la fois, à partir d’une extrémité (réduit la taille à partir d’un bout)
Endonuclease : coupe au milieu de la chaîne d’acide nucléique, produisante des fragments
Vrai ou faux. Les exonucleases digèrent les acides nucléiques de 5’ vers 3’?
Faux, autant dans le sens 5’ vers 3’ que 3’ vers 5’
Quelles sont les enzymes de restriction?
Endonucleases de restriction qui coupent l’ADN à des endroits caractérisés par des sites de restrictions (séquence des nucleotides spécifiques)
Pourquoi les bactéries ont des enzymes de restriction?
Parce que elles servent de défense contre les virus (à adn double brin) des bactéries en coupant l’ADN étranger en morceaux
Les enzymes de restriction font partie d’un système de défense de bactéries
Comment sont nommées les enzymes de restriction ?
Selon l’espèce de bactérie desquelles elles ont été isolées
Quel type de séquences sont reconnues par les enzymes de restriction ?
Séquences palindromiques (site de clivage pour coupure symétrique)
Quelle séquence EcoR1 reconnaît toujours?
5’ GAATTC 3’
Vrai ou faux. Il y a beaucoup de palindromes dans le génome ?
Vrai, il y en a énormément
Quelles sont les 2 types de bouts qu’il peut y avoir par un clivage d’un palindrome?
Bouts francs : pas de partie d’ADN simple brin
Bouts collants : extrémités cohésives parce que un nucleotide apparié seulement, les autres sont tous simple brins (ex: EcoR1)
A quoi ça sert de couper au site de restriction?
Avoir des fragments qui s’insèrent dans la coupure pour recombiner l’ADN
Pour la technologie qu’est qui est intéressant?
Prédiction possible: on sait où on peut digérer l’ADN en repérant les palindromes respectif à par exemple EcoR1
Qu’est-ce que la cartographie avec des enzymes de restriction?
Ma poing des sites de restriction de différentes enzymes sur des adn pour définir les séquences
Comment séparer et identifier les fragments d’ADN coupés après digestion avec des enzymes de restriction?
Fragments d’ADN peuvent être séparés selon leur taille par électrophorèse sur gel d’Agarose
Comment fonctionne l’electrophorese sur gel d’agarose?
Retarde adn selon la taille (plus il est grand moins il avance)
ADN charge négativement et alors en appliquant un champs électrique on peut séparer les fragments obtenus (adn cherche à migrer vers +)
Quelle molécule permet de visualiser les fragments d’ADN séparés par electrophorese sur gel d’agarose?
Bromure d’ethidium est une molécule fluorescente (sous UV) qui s’intercale à l’intérieur de la double hélice
Les bandes fluorescentes correspondent à l’ADN
Comment est-ce que la technique avec le gel d’agarose permet de prédire ?
On peut savoir ai l’ADN à été digéré et par combien d’enzymes donc on peut prédire où sont les sites
Une fois qu’on a ça, on peut reconnaître dans n’importe quel autre melange
Quelle enzyme joint 2 fragments d’ADN ensemble?
Ligase
Qu’est-ce que la ligation?
Réformation du lien phosphodiester 3’ -> 5’ pour recombiner l’ADN
Qu’est-ce qui caractérise une ligation de bouts cohésifs?
Ils doivent être compatibles
Besoin d’ATP