Semaine 12 - Immunoessais Flashcards
Comment peut-on expérimentalement distinguer des anticorps hétérophiles vs des anticorps anti-animaux ?
Ajouter du FC block.
Ajouter aux réactifs des protéines sériques de même source animale que celle des Ab.
Quelle performance les tests de TSH doivent offrir pour être considérés de 3ième génération ?
Ils doivent avoir un CV<20% à une concentration de 0,01 mUI/L.
Quel est le résultat d’une interférence à la biotine sur un immunoessais non-compétitif versus compétitif ?
Lorsque la liaison biotine-streptavidine est utilisée dans le cadre d’un test immunométrique «sandwich», l’excès de biotine dans l’échantillon peut bloquer la liaison des anticorps biotinylés aux sites de liaison de la biotine sur la phase solide recouverte de streptavidine, ce qui entraîne des résultats faussement faibles.
En revanche, pour les dosages immunologiques «compétitifs», un excès de biotine dans l’échantillon peut bloquer la liaison de l’analyte biotinylé aux sites de liaison de la biotine sur la phase solide recouverte de streptavidine, entraînant des résultats faussement élevés.
La biotine peut être utilisé pour l’amplification du signal ou la liaison covalente des anticorps de capture à une surface.
Comment le test compétitif diffère-t-il du test non-compétitif en termes de sensibilité ?
Moins sensible que non-compétitif.
Quel type de molécules est idéal pour le test compétitif ?
Petites molécules.
Comment la liaison à l’anticorps pour l’antigène marqué change-t-elle dans le test compétitif en fonction de la concentration d’antigène non marqué ?
Elle est inversement proportionnelle.
Quel est l’avantage de réaliser le test compétitif en mode séquentiel ?
Amélioration de la limite de détection.
En quel quantité le réactif doit-il être présent en immunoessais compétitif ? Et en non-compétitif ?
- Compétitif : Le réactif est limitant
- Non-compétitif : Le réactif est en excès
Quel avantage technique est associé aux tests en phase homogène dans les immunoessais ?
Ne nécessite pas de séparation de phases (anticorps ou antigène libre et marqué) = réaction de type précipitin, Rapidité et simplicité.
Avec quel type d’anticorps les deux phases de capture d’un essais non-compétitif peuvent être effectuées en une seule étape sans lavage intermédiaire?
Avec des anticorps monoclonaux reconnaissant des épitopes distincts.
Quelles sont les enzymes les plus couramment utilisées comme marqueurs enzymatiques dans les immunoessais ?
Peroxidase de raifort (HRP), phosphatase alcaline, β-galactosidase, glucose-6 phosphate déshydrogénase.
Quelle condition doit être satisfaite pour que les marqueurs enzymatiques génèrent des résultats fiables dans les immunoessais ?
La conjugaison doit générer des conjugués stables sans altérer la réactivité immunologique.
Quels sont les avantages et inconvénient des marquages radioactifs pour les immunoessais ?
Avantages :
- Moins coûteux
- Marquage qui n’affecte pas les propriétés de la molécule marquée
- Meilleure sensibilité analytique que la néphélométrie
- Peu d’effet d’interférence des indices sériques sur le signal.
Désavantages :
- Techniques manuelles
- Requiert une gestion des déchets, un permis, une documentation et la formation du personnel
- Méthode en phase hétérogène
- Surveillance étroite et validation des courbes d’étalonnage, réactifs instables (demi-vie)
- Nécessite compteur gamma.
Décrire le principe du EMIT (enzyme multiplied immunoassay technique).
Enzymatique en phase homogène – non-compétitif.
L’analyte (drogue) dans l’échantillons compétitionne avec un analyte marqué avec l’enzyme glucose-6-phosphate déshydrogénase (ou Malate déshydrogénase, Lysozyme). La liaison AC-Analyte analogue+G6P empêche l’activité de l’enzyme G6P. Si présence d’analyte dans l’échantillon, prend la place de l’analyte analogue+G6P qui est libre et qui peut lier son substrat (NAD) et généré un produit (NADH) qui peut être lue par absorbance (340nm). Si faible concentration dans l’échantillon : peu d’activité. Concentration élevée : plus d’activité (neutralise certains réactifs ab et laisse plus d’enzymes libres de réagir avec le substrat). Relation linéaire entre la concentration du médicament et l’activité mesurée. Lecture par spectrophotométrie. Limité aux petites molécules (médicaments, stéroides, vitamines).
Décrire le principe CEDIA (Cloned enzyme donor immunoassay)
Enzymatique en phase homogène – non compétitif.
Une enzyme (comme la bêta-galactosidase) est génétiquement modifiée en deux fragments inactifs : un petit fragment appelé donneur d’enzyme (ED) conjugué à l’analogue de l’analyte, et un plus grand fragment accepteur d’enzyme (EA) : lorsque les deux fragments s’associent, l’enzyme complète convertit un substrat en un produit coloré. Si des molécules d’analyte sont présentes dans l’échantillon, elles entreront en compétition avec fragment ED congugé en solution pour les sites d’AC, de sorte que l’analogue marqué ED libre pourra se lier à l’EA et générer un signal colorimétrique directement proportionnel à la quantité d’analyte.