Colorations spéciales: 2nd part Flashcards Preview

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Flashcards in Colorations spéciales: 2nd part Deck (103)
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1

Coloration des microorganismes

Voir p.199 pour liste de quelle colo pour quelle bacterie (pense pas que SP ira trop en detail sur l'examen)

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Colo Gram: utilité

Démonstration des bactéries dans les tissus
C+: Staph, Strep
B+: Bacillus, Clostridium, Mycobactérium, Lactobacille, Listeria
C-: Neisseria
B-: E. coli, Kleb, Salmonelle, Shigelle, Proteus, Pseudo
CB-: Brucella, Haemophilus

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Colo Gram: réactifs utilisés

Cristal violet: colo toutes les bactéries sans distinction
Iodine: précipitation du crystal violet
Acétone: différentiation
- pour G+: déshydratation de paroi et membrane bactérienne --> resserrement des pores membranaires --> retient complexe violet crystal - iode
- pour G-: dissolution des lipides --> enleve violet crystal
Fuchsine basique:
- colo des bactéries gram neg
- iode- violet crystal masque fuchsine basique so G+ restent bleu-violet
Acide picrique - acétone: contrecolo et enlève surplus de colo

4

Colo Gram: mécanisme en cause

Méthode régressive
Gram pos paroi plus épaisse de peptidoglycanes
Gram neg paroi + de lipopolysaccharides --> sera dissoute pendant différentiation --> crystal violet s'enlève --> accèpte fuchsine basique

5

Pourquoi ne peut pas utiliser alcool pour déshydrater tissu apres colo?

Décoloration des bactéries
Doit faire blot-dry au lieu

6

Ziehl Neelsen (ZN): utilité

Démonstration des bactéries acido-alcoolo-résistantes dans les tissus

7

ZN: réactifs utilisés

1. Fuchsine carbolique (ou phénolée) à froid: colo bactéries acido-alcoolo résistantes (principe p. 226 de notre livre)
2. Alcool-acide: différentitation --> retrait du colo de toutes les bactéries qui ne possèdent pas de paroi cireuse
3. Bleu de méthylène ou Hématox de Harris (+ bleuissement): contrecolo

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ZN: mécanisme en cause

Has to do with: liens sel, densité et porosité des membranes
Bactéries acido-alcoolo résistantes (AAR): colo difficile cuz paroi possède substance cireuse, mais une fois colo se decolo pas (même en présence d'acide et d'alcool)

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ZN: résultats

Bactéries AAR: rouge
GR: orange
Noyaux: bleu
Fond: bleu

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ZN: notes

Si coupes chauffées --> pas mettre dans coplin cuz bactéries peuvent sortir du tissu --> faux pos et neg --> doit faire colo directement sur lame
Fixateur Carnoy peut détruire propriété AAR
Tissus décalcifiés peuvent donner faux neg --> acides utilisés peuvent détruire propriété AAR
Doit faire lame CQ
Bain d'étalement propre et utilise eau filtrée pour toutes étapes avec eau (filtre qui retient les bactéries)

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Warthin-Starry (WS)

Démonstration des spirochètes dans les tissus

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WS: réactifs

1. Solution nitrate d'Ag: imprégnation, formation complexe organo-métalliques
2. Solution nitrate d'Ag - hydroquinone gélatinisée: développeur, contient acide citrique qui favorise oxydation des groupes glycols en group aldéhyde qui peuvent réagir avec Ag

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2 roles de hydroquinone

1. Agent réducteur: permetAg de se déposer sur les complexes organo-métalliques
2. Agent de développement: augmente la vitesse de transformation de Ag ionique en Ag métallique et empêche la reconversion

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WS: mécanisme en cause

Imprégnation argyrophile

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WS: résultats

Spirochètes: noir
Autres bactéries: noir
Fond: jaune pâle- brun pâle due à hydroquinone

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WS: notes

Spirochètes jaunâtres: développement insuffisant
Iode + thiosulfate de sodium pour retirer colo si surdéveloppé
Mélanine, noyaux et certains pigments --> grande affinité pour Ag
Autres méthode similaires:
1. Dieterle --> spirochètes et legionella
2. Steiner & Steiner --> spirochètes, légionella, hélicobacter

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Grocott: utilité

Démonstration des champignons et mycoses dans les tissus
Souvent utilisée

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Lames CQ

Habituellement intestin ou estomac cuz colo mucines aussi
Veut donc les comparer pour faire sur que vrm bactéries et non colo de mucines sur lames inconnues

19

Grocott: réactifs utilisés

Sensiblement les mêmes que pour Acide-périodique- méthénamine Ag (membranes basales)

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Grocott: mécanisme d'action

Méthode basée sur teneur très élevée en glucide de la paroi des champignons
Oxydation des glucides par acide chromique (plus for que ac. périodique) --> production aldéhydes et bcp de suroxydation en carboxyles puisque laisse l'ac. chromique pour 1h
Reste seulement assez d'aldéhyde pour détecter dans les structures très riches en glucides
Aldéhydes détectées par méthénamine Ag

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Grocott: résultats

Contour champignons et levures: noir
Partie interne de champignons et levures: gris
Fond: vert (avec vert lumière pour contrecolo)
Autres éléments (mucines, glycogène, mélanine): noir

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APS pour microorganismes

Méthode pour démontrer microorganismes avec réactif de Schiff similaire à celle pour démontrer glycogène et mucines neutres
Polysaccharides et hydrates de carbone dans la paroi des mycoses et champignons oxydés en aldéhydes par réactif de Schiff, etc.

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APS microorganismes: résultats

Mycoses, champignons: rose, magenta
Fond: vert (avec vert lumière)

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APS microorganismes: notes

Peut être utilise d'utiliser diastase si lame contient aussi du glycogène --> veut le sortir de la way

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Giemsa (May-Grunwald Giemsa): utilité

Démontre bactéries, rickettsies et Toxoplasma gondii
Aussi utilise pour différentiation de cellules présentes dans tissu hématopoiétique

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Giemsa: réactifs

1. Solution travail de Jenner
2. Solution travail de Giemsa
3. ac. acétique 1%: différentiation

27

Giemsa: résultats

Bactéries: bleu
Noyau: bleu
Cytoplasme des GB: rose, gris, bleu --> dépend du type de cellule et stade de développement

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Pigment et minéraux: définition

Subs particulières colorées ou incolores qu'on colo artificiellement
Présents dans tissu état normal ou pathologique

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Classification:
1. pigments artéfacts

Effet de la prep du tissu
a. formaldéhyde
b. mercure
c. chrome
d. Nedzel (paraffine)
e. Malaria --> pigment dans cellules phagocytaires

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Classification:
2. pigments endogènes

Effet du métabolisme (conditions normales ou pathologiques)
A) Hématogènes (système hématopoiétique): porphine et porphyrines, Hb, hémosidérine et fer, pigments biliaires
B) non hématogènes (autres pigments endogènes): mélanine et pseudomélanine, lipopigments, fer, calicum, cuivre, ac. urique et urates