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Enrobage et Microtomie Flashcards

1
Q

But de l’enrobage

A

Support externe
Meilleure conservation du tissu
Production de rubans

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Q

Choix du type de paraffine utilisé

A

Meme que le media utilisé pour imprégnation
Doit considérer: point de fusion et la qualité de la fabrication de ruban
Paraffine doit être refroidie rapidement pour une cristallisation uniforme (meilleure élasticité et résistance)

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3
Q

Point de fusion élevé

A

Meilleur support pour tissus durs
Plus facile sections minces
Rubans plus difficile à faire

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4
Q

Point de fusion bas

A

Support pour tissus durs moins bon
Section minces plus difficiles à obtenir
Ruban plus facile à faire

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5
Q

Pour un bon enrobage doit considérer

A

Disposition des pièces dans le moule
Orientation des pièces dans le moule
Surface de coupe

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6
Q

Disposition des pièces dans le moule: 1 pièce de tissu

A

Doit être au centre sinon ruban difficile à faire (pas assez de paraffine autour de la pièce)

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7
Q

Disposition des pièces dans le moule: 2 ou 3 pièces de tissu dans le même moule

A

Unes à côté des autres en diagonal (diminue la compression lors de la coupe)
Laisser une espace entre les pièces

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8
Q

Disposition des pièces dans le moule: Kyste

A

Coupé en 2 lors de l’examen macroscopique

Surface coupée doit être en contact avec le fond du moule

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9
Q

Disposition des pièces dans le moule: Fragments plats

A

Tout le fragment en contact avec le fond du moule

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10
Q

Orientation des pièces dans le moule: pièce non parallèle

A

Côtés non parallèles
Le plus petit côté vers le bas
Couteau commencera à couper une petite portion au début
Moins de compression

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11
Q

Orientation des pièces dans le moule: Structure tubulaire

A

Ex: canaux déférents, veines, artères, trompes de Fallope

Couteau du microtome doit couper au travers la lumière de la structure

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12
Q

Orientation des pièces dans le moule: Surface épithéliale

A

Ex: peau, intestin
Portion plane dans le fond du moule
Épithélium vers le dessus du bloc (coupé en dernier)
Minimise la pression et distorsion de l’épithélium

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13
Q

Orientation des pièces dans le moule: Plusieurs fragments (avec surface épithéliale ou non

A

Orientés dans le même sens
Épithélium dans le haut
Disposition oblique

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14
Q

Orientation des pièces dans le moule: encre de Chine

A

Surface marquée doit être visible
Certains cas surface marquée et non marquée doivent être visibles
Orientation dans le même sens

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15
Q

Précaution particulières lors de l’enrobage

A
  1. Orientation du spécimen dans le moule (facilite coupe, meilleure visibilité au microscope), dépend du spécimen
  2. Position du spécimen dans le moule (ne doit pas toucher les côtés du moule), centrer le spécimen
  3. Déformation du spécimen (ne pas serrer ou compresser le tissu, chauffe un peu les pinces)
  4. Surface de coupe (doit être celle qui se trouve en contact avec le fond du moule)
  5. ID bloc
  6. Durcissement de la paraffine (plus rapidement possible)
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16
Q

Effets d’un mauvais enrobage: orientation

A

Erreur la plus fréquente

Doit refondre le bloc, réorienter, réinclure

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17
Q

Effets d’un mauvais enrobage: Refroidissement du bloc

A

Trop lent: cristallisation irrégulière, nuit à la coupe

Trop vite: présence de paraffine entre tissu et moule (trop de rétraction), bloc à surface concave

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18
Q

Effets d’un mauvais enrobage: Tissu trop froid

A

Paraffine dans tissu solidifie pas en même temps que celle dans le bloc (artéfact d’enrobage ou artéfact de couches d’inclusion)

  • Formation de halo autour de la pièce
  • Tissu détache pendant la coupe
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19
Q

Effets d’un mauvais enrobage: Épaisseur de paraffine

A

Pas assez sur le dos du bloc (tissu découvert pendant refroidissement)

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20
Q

Effets d’un mauvais enrobage: Attend trop longtemps

A

Avant de mettre tissu dans bloc

  • couche de paraffine durcit au fond du moule
  • plusieurs couches se superposent (artéfact de couches d’inclusion)
  • rabotage inutile
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21
Q

Problème: tissu apparence molle

A

Apparence: Voit à la station d’enrobage, centre de la pièce mal circulé (texture molle)

Cause: section trop épaisse qui cause la compression entre le dessus et dessous de la cassette (liquides ne pénètrent pas tout le tissu)

Prévention: coupe mince, fixe bien, pas de problème mécanique

Retrait: 
A) Si vu à la station d'enrobage: couper fragment plus mince, remettre dans cassette et traiter
1. xylène (enlève paraffine)
2. Tetrahydrofurane (déshydrate/éclaircit)
3. xylène
4. paraffine (imprégnation)
5. enrobe
B) si fixation imcomplète
1. fond paraffine
2. mettre dans circulateur
3. procédure de nettoyage du circulateur
4. manuellement dans alcool 95% et 70%
5. formol
6. circuler avec prochaine batch
22
Q

Problème: orientation incorrecte

A

Apparence: structures essentielles difficiles ou impossibles à visualiser à la microscopie

Cause: mauvaise orientation du tissu

Prévention: Marquer (incision) la surface à être enrober vers le haut, instruction sur cassette ou feuille de travail et ouvrir les spécimens du GI tract (ne rouleront pas)

23
Q

Problème: contamination

A

Apparence: voit à la microscopie whatever qui contamine

Cause: transfert de fragments de tissu d’un spécimen à l’autre

Prévention: nettoyer pinces et ouvrir une seule cassette à la fois

24
Q

Problème: Tissus pas enrobés au même niveau

A

Apparence: atteint pas toute la surface en même temps à la microtome

Cause: pas assez aplani dans le fond du moule ou plusieurs fragments enrobés à des niveaux différents

Prévention: pression ferme et uniforme sur le tissu, garder la paraffine fondue dans le fond du moule, travailler rapidement

25
Problème: morceaux manquants
Apparence: absence de fragments Cause: manque d'attention, erreur à la salle de coupe Prévention: noter # de fragments, vérifier intérieur de la cassette avant de jeter
26
Épaisseur de coupe
``` 4 microm (routine) 2 microm (imprégnation Ag) 6 microm (rouge congo) ```
27
Microtome à glissière
Couteau mobile et déplace horizontal Tissus inclus dans celluloidine Coupes sur grandes surfaces Pas de coupes sériées
28
Microtome à balancier
Peu utilisé Couteau fixe Objet déplace Pour petites pièces
29
Microtome coupe ultramince
ME Biseau du couteau en verre ou diamant Pour très petites pièces seulement
30
Microtome rotatif
``` Microtome de Minot Plus populaire Rotatif (roue motrice) Couteau fixe Déplacement du porte-objet: avancement (horizontal) d'une épaisseur précise et haut-bas Biseau vers le haut (dangereux) Stable (pesant) Facile d'entretien Bon pour coupe sériée Pas bon pour gros blocs ```
31
Microtome-cryostat
Tissu congelé Pour STAT, Z, fluo Souvent même principe que rotatif, mais dans enceinte à -20 oC Impossible de faire des rubans
32
Couteaux
Jetables les plus populaires même si atteignent TP plus rapidement, doivent être dans porte-lame pour éviter vibrations Bouts coupants des jetables souvent recouvert de chrome ou platine pour augmenter résistance et durabilité Recouvrement de téflon pour cryotome (diminue friction) Biplan en coin: profile C, lames jetables
33
Angle de couteau
1. Angle du biseau (27-32), dépend du couteau | 2. Angle de structure (15), 2 facettes du couteau, dépend du couteau
34
Angle de travail
1. Angle de dégagement (3-8): formé par facette inférieure du biseau et surface du bloc si pas bon: compression du tissu, pas de ruban 2. Angle d'inclinaison AKA angle d'attaque (15): formé par facette inférieure du couteau et surface du bloc
35
Angle de dégagement trop grand
``` Grattage du bloc Pas de ruban Coupes s'enroulent Coupes se déchirent Chattering Ondulations ```
36
Angle de dégagement trop petit
Coupes comprimées Coupes plissées Coupes décollent du rasoir et collent sur bloc Coupes épaisseur inégales: alterne mince-épais
37
Problème microtomie: ruban incurvé
``` causes: 1. bords horizontaux du bloc pas parallèles 2. bord du bas bloc pas parallèle au bord couteau 3. surplus de paraffine sur un coté 4. consistance du tissu varie 5. couteau émoussé correction: 1. aligner bords bloc 2. fix it 3. enlève surplus 4. refroidir uniformément 5. déplace ou remplace couteau ```
38
Problème microtomie: surface du bloc pas sectionnée également
cause: porte bloc ou bloc pas ajusté parallèlement au couteau, gaspillage de tissu correction: s'assurer que parallèle
39
Problème microtomie: trous dans section
``` cause: 1. attaque bloc trop agressive 2. déshydratation excessive 3. air dans tissu (ex: poumon) 4. imprégnation ou circulation non complète correction: 1. doucement 2. trempe dans bain eau glacé avant de sectionner 3. ré-imprégner 4. ré-imprégner ou re-circuler ```
40
Problème microtomie: pas de ruban formé
``` cause: 1. couteau émoussé 2. paraffine trop dure 3. angle dégag. trop grand 4. TP trop basse 5. débris sur couteau correction: 1. déplace ou change 2. ré-inclure paraffine point fusion plus bas 3. ajuster 4. ajuster 5. nettoyer lame avec xylène ```
41
Problème microtomie: sections adhèrent au bloc
cause: 1. couteau émousse 2. angle dégag. trop petit 3. TP trop élevée 4. paraffine trop molle correction: 1. déplace ou change 2. augmente 3. ajuste 4. utilise paraffine plus dure
42
Autres Problème microtomie
voir p. 99, 102-104 dans notes
43
Rabotage
TP Enlève excès de paraffine qui recouvre la surface de coupe du tissu Peut faire avant de mettre tissus sur glace
44
Coupe au hasard
Surface 100% (toute surface du tissu doit être visible)
45
Coupe niveaux
2 ou 3 niveau | Souvent pour moyennes et petites pièces
46
2 niveaux
1 --> 85% | 2 --> 100%
47
3 niveaux
1 --> 75% 2 --> 90% 3 --> 100%
48
Coupe sériée
Délicat Sauve toute les sections, mêmes celles qui ne sont pas belles Numérotées dans ordre de coupe Pour petites biopsies Pour avoir imagne cellulaire du tissu niveau par niveau
49
Précautions pour la coupe sériée
Use même microtome, oriente même façon, nouvelles lame, pression égale, ne pas arrêter formation du ruban mi-chemin
50
Facteurs qui influencent la microtomie
p. 103
51
Aspects a considérer
1. angle de dégagement 2. ajustement mécanique 3. couteau-lame 4. tissu (décal, refroidit, etc.) 5. vitesse de coupe 6. température

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