Enrobage et Microtomie Flashcards Preview

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Flashcards in Enrobage et Microtomie Deck (51)
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1

But de l'enrobage

Support externe
Meilleure conservation du tissu
Production de rubans

2

Choix du type de paraffine utilisé

Meme que le media utilisé pour imprégnation
Doit considérer: point de fusion et la qualité de la fabrication de ruban
Paraffine doit être refroidie rapidement pour une cristallisation uniforme (meilleure élasticité et résistance)

3

Point de fusion élevé

Meilleur support pour tissus durs
Plus facile sections minces
Rubans plus difficile à faire

4

Point de fusion bas

Support pour tissus durs moins bon
Section minces plus difficiles à obtenir
Ruban plus facile à faire

5

Pour un bon enrobage doit considérer

Disposition des pièces dans le moule
Orientation des pièces dans le moule
Surface de coupe

6

Disposition des pièces dans le moule: 1 pièce de tissu

Doit être au centre sinon ruban difficile à faire (pas assez de paraffine autour de la pièce)

7

Disposition des pièces dans le moule: 2 ou 3 pièces de tissu dans le même moule

Unes à côté des autres en diagonal (diminue la compression lors de la coupe)
Laisser une espace entre les pièces

8

Disposition des pièces dans le moule: Kyste

Coupé en 2 lors de l'examen macroscopique
Surface coupée doit être en contact avec le fond du moule

9

Disposition des pièces dans le moule: Fragments plats

Tout le fragment en contact avec le fond du moule

10

Orientation des pièces dans le moule: pièce non parallèle

Côtés non parallèles
Le plus petit côté vers le bas
Couteau commencera à couper une petite portion au début
Moins de compression

11

Orientation des pièces dans le moule: Structure tubulaire

Ex: canaux déférents, veines, artères, trompes de Fallope
Couteau du microtome doit couper au travers la lumière de la structure

12

Orientation des pièces dans le moule: Surface épithéliale

Ex: peau, intestin
Portion plane dans le fond du moule
Épithélium vers le dessus du bloc (coupé en dernier)
Minimise la pression et distorsion de l'épithélium

13

Orientation des pièces dans le moule: Plusieurs fragments (avec surface épithéliale ou non

Orientés dans le même sens
Épithélium dans le haut
Disposition oblique

14

Orientation des pièces dans le moule: encre de Chine

Surface marquée doit être visible
Certains cas surface marquée et non marquée doivent être visibles
Orientation dans le même sens

15

Précaution particulières lors de l'enrobage

1. Orientation du spécimen dans le moule (facilite coupe, meilleure visibilité au microscope), dépend du spécimen
2. Position du spécimen dans le moule (ne doit pas toucher les côtés du moule), centrer le spécimen
3. Déformation du spécimen (ne pas serrer ou compresser le tissu, chauffe un peu les pinces)
4. Surface de coupe (doit être celle qui se trouve en contact avec le fond du moule)
5. ID bloc
6. Durcissement de la paraffine (plus rapidement possible)

16

Effets d'un mauvais enrobage: orientation

Erreur la plus fréquente
Doit refondre le bloc, réorienter, réinclure

17

Effets d'un mauvais enrobage: Refroidissement du bloc

Trop lent: cristallisation irrégulière, nuit à la coupe
Trop vite: présence de paraffine entre tissu et moule (trop de rétraction), bloc à surface concave

18

Effets d'un mauvais enrobage: Tissu trop froid

Paraffine dans tissu solidifie pas en même temps que celle dans le bloc (artéfact d'enrobage ou artéfact de couches d'inclusion)
- Formation de halo autour de la pièce
- Tissu détache pendant la coupe

19

Effets d'un mauvais enrobage: Épaisseur de paraffine

Pas assez sur le dos du bloc (tissu découvert pendant refroidissement)

20

Effets d'un mauvais enrobage: Attend trop longtemps

Avant de mettre tissu dans bloc
- couche de paraffine durcit au fond du moule
- plusieurs couches se superposent (artéfact de couches d'inclusion)
- rabotage inutile

21

Problème: tissu apparence molle

Apparence: Voit à la station d'enrobage, centre de la pièce mal circulé (texture molle)

Cause: section trop épaisse qui cause la compression entre le dessus et dessous de la cassette (liquides ne pénètrent pas tout le tissu)

Prévention: coupe mince, fixe bien, pas de problème mécanique

Retrait:
A) Si vu à la station d'enrobage: couper fragment plus mince, remettre dans cassette et traiter
1. xylène (enlève paraffine)
2. Tetrahydrofurane (déshydrate/éclaircit)
3. xylène
4. paraffine (imprégnation)
5. enrobe
B) si fixation imcomplète
1. fond paraffine
2. mettre dans circulateur
3. procédure de nettoyage du circulateur
4. manuellement dans alcool 95% et 70%
5. formol
6. circuler avec prochaine batch

22

Problème: orientation incorrecte

Apparence: structures essentielles difficiles ou impossibles à visualiser à la microscopie

Cause: mauvaise orientation du tissu

Prévention: Marquer (incision) la surface à être enrober vers le haut, instruction sur cassette ou feuille de travail et ouvrir les spécimens du GI tract (ne rouleront pas)

23

Problème: contamination

Apparence: voit à la microscopie whatever qui contamine

Cause: transfert de fragments de tissu d'un spécimen à l'autre

Prévention: nettoyer pinces et ouvrir une seule cassette à la fois

24

Problème: Tissus pas enrobés au même niveau

Apparence: atteint pas toute la surface en même temps à la microtome

Cause: pas assez aplani dans le fond du moule ou plusieurs fragments enrobés à des niveaux différents

Prévention: pression ferme et uniforme sur le tissu, garder la paraffine fondue dans le fond du moule, travailler rapidement

25

Problème: morceaux manquants

Apparence: absence de fragments

Cause: manque d'attention, erreur à la salle de coupe

Prévention: noter # de fragments, vérifier intérieur de la cassette avant de jeter

26

Épaisseur de coupe

4 microm (routine)
2 microm (imprégnation Ag)
6 microm (rouge congo)

27

Microtome à glissière

Couteau mobile et déplace horizontal
Tissus inclus dans celluloidine
Coupes sur grandes surfaces
Pas de coupes sériées

28

Microtome à balancier

Peu utilisé
Couteau fixe
Objet déplace
Pour petites pièces

29

Microtome coupe ultramince

ME
Biseau du couteau en verre ou diamant
Pour très petites pièces seulement

30

Microtome rotatif

Microtome de Minot
Plus populaire
Rotatif (roue motrice)
Couteau fixe
Déplacement du porte-objet: avancement (horizontal) d'une épaisseur précise et haut-bas
Biseau vers le haut (dangereux)
Stable (pesant)
Facile d'entretien
Bon pour coupe sériée
Pas bon pour gros blocs