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Flashcards in Principe de la coloration, coloration nucléaire et éléments non-nucléaires Deck (61)
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1

But de la coloration

Teindre élément ou substance de manière durable
Colo influencée par prise sélective de réactifs par les tissus et par la perte sélective de produits et/ou réactifs par ces tissus (dépend de affinité et quantité du produit cool par rapport à l'élément tissulaire visé)

2

Absorption

Propriété de la plupart des colo
Colo abs DANS le tissu et formation de liens chimiques ensuite
ex: colo des lipides

3

Adsorption

Attraction des particules à la SURFACE
Point de rencontre colo-tissu (ensuite soit entre dans le tissu ou fait liens right la)
Si n'entre pas, fait liens fragiles qui résistent mal à la différenciation

4

Porosité tissulaire

AKA perméabilité
Dépend du tissu
Colo entre dans tissu par pores
2 facteurs influencent:
1. taille molécule cool
2. densité de la structure (plus dense: GR, muscle, cytoplasme, collagène: moins dense)

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Mécanismes chimiques

1. liaisons chimiques (électrostatique, liens sels, ioniques): svt colo pas de charge, besoin de la développer, attirance de charges inverses
2. liaisons hydrogène: liaisons avec H2O, N, F, Cl, fragile
3. liaison covalence: entre les sites réactifs tissulaires et les auxochromes (partage d'é
4. Forces Van der Waals: seulement sur petites distances, attraction électrostatique entre é d'un atome et le noyau de l'atome voisin. très fragile (ex: colo d'élastine)

6

PR-

Amphotères (amine: NH3+ et carbonyle: COO-)
Veut seulement une charge pour pas que tous les colo s'attachent

7

Colorants

Plupart composés de sels complexes avec tendance acide ou basique
Similaire aux PR- (nature dépends de radicaux: NH3+, COO-, SO3-)
Groupe + et - = amphotère

8

Si une structure tissulaire est +

Basique
Aime colo acide (-)
acidophile
ex:
cytoplasme
muscles
collagène
GR

9

Si une structure tissulaire est -

Acide
Aime colo basique (+)
basophile
Ex: noyau (ADN/ARN)

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Colo directe

Usually ca qu'on use
Naturelle (pas besoin d'apport est)
ex: éosine

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Colo indirecte 1

Colo pas d'affinité pour structure
Besoin mordant (fait le lien entre 2 structures)
Complexe colo-mordant = laque
ex: hématoxyline + aluminium = laque d'hématéine
ex de mordant: Al, Fe, SO4, Cr
1. mordant dans fixateur (ex: Bouin)
2. mordant avant colo (pas souvent)
3. mordant mélangé avec colo

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Colo indirecte 2

Agent de rétention qui permet de retenir la colo (pas un trait d'union, retient colo déja en place)
Empêche décolo (principale utilité)
ex: Verheoff pour fibres élastiques
Colo un peu d'affinité pour le tissu

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Accentueur et accélérateur

Augmente le pouvoir de colo de certaines solutions
Augmente parfois la sélectivité de certains colo pour structures

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Coloration progressive

Arrête colo à temps voulu

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Colo régressive

Surcoloration et ensuite décoloration lente avec un solvant pour avoir les même résultats que progressive (quand seulement les éléments voulus on la teinte voulue)

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Différentiation par excès de mordant

Doit avoir eu utilisé mordant pendant colo
Par effet de compétition (retrait de colo)
Déttachement du colo et liaison avec mordant (excès) en solution
Pas la même chose que décolo qui enlève tout

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Différentiation par acide

Acide brise le lien mordant-tissu

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Mécanismes d'action de la colo nucléaire

Mal connu
2 mécanismes:
1. colo avec colo basique (+) sur ADN (-)
2. colo avec colo combin. ou suivit d'un mordant métallique (-) sur nucléohistones (+)

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Colorants nucléaires cationiques (+)

Ionisation des groupes amines (+) du colo en solution acide
3 types d'anions tissulaires (noyau):
1. groupe phosphate (ac. nucléique): PO4 -> PO3-
2. groupe esters (sulfatés): SO4 -> SO3-
3. groupes carboxyles (glucides): COOH -> COO-

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Comment pH influence propriétés des colo basiques

pH 1.0: seuls groupes sulfatés (structures riches en hydrates de carbone) seront colorés
pH 2.5-3.0: colo groupes sulfatés et phosphates
pH 4.0-5.0: colo tous les groupes
pH > 5.0: colo de tous les groupes anioniques, neutres et basiques des PR- et s'intensifie plus le pH augmente

21

pH routine colo basiques

3.0-5.5
Ne colore donc pas les noyaux de façon très spécifique

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Bleu de toluidine O

Seul ou contrecolo
Acidifié par ac acétique glacial
Rinçage ou déshydratation peut causer perte de colo
- essuyer lame sur papier filtre et déshydrater avec n-butanol
Noyaux et hydrates de carbone acides: bleu
Certaines structures contanant des HC: rouge par métachromasie
ARN cytoplasme (coprs de Nissi): bleu

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Rouge neutre

Acidifié par ac acétique glacial
Rinçage ou déshydratation peut causer perte de colo
Peut utilisé comme fluorochrome
Noyaux et autres structures basophiles: rouge (Safranine O donne même résultats, mais plus long)
Noyaux et ARN cytoplasmique: jaune-orange en fluorescence

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Vert de méthyle

Rincer rapidement dans l'eau
Acétone ou n-butanol pour déshydratation
Noyaux et autres structures basophiles: vert-bleu

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Safranine O

# de groupements méthyle dans la molécule dertermine couleur du colorant: rouge ou orange --> métachromasie
Noyaux: rouge

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Mécanisme pour colo cytoplasmique (et autre éléments non-nucléaires)

Mieux connue
Due principalement aux PR- (leurs groupes chargés)
Peuvent être chargés + (NH3+) ou - (COO-) --> dépend du pH
Amphotères
pH < 6.0: +

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Colo non nucléaires

Majorité sont anionique (chargés -) et se combinent à des groupes tissulaires + (ex: a-a tels que arginine, histidine et lysine)

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Éosine

Colo ou contrecolo le plus utilisé
Entièrement chargé à 7.0, mais colo doit se faire < 6.0 puisque le point isoélectrique des PR- est 6.0 (veut que les PR- soient +)
Si pH aspect muddy)
Meilleur résultat pH 4.6-5.0
Utilisé correctement = 3 tons de rose

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Chromogène

Partie coloré de la molécule
Chromophore = arrangement d'atomes dans chromogène qui est responsable de l'abs de lumière visible du spectre, déplace le système de résonance de la molécule
Plupart des colo ont radicaux additionnels qui modifient la couleur du composé

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Auxochrome

Partie qui s'attache au substrat
Chaine attachée au chromogène qui peut être:
1. groupe ionisant
2. groupe qui réagit pour former un lien covalent avec un substrat
3. arrangement d'Atomes qui forment des liens avec un ion métallique (mordant)
Plusieurs colo contiennent plus qu'un auxochrome
Nombre et type peut influencer la couleur d'un colo