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Biologie > Méthodes d'études de la cell_MET > Flashcards

Méthodes d'études de la cell_MET Flashcards

c'est le cours de montier

1
Q

la biologie cellulaire c’est quoi comme science ?

A

science des lois régissant phénomènes communs aux ≠ types de cell

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2
Q

quel est le but de la biologie cellulaire ?

A

préciser les relations entre les structures que l’on peut observer en microscopie et leurs fontion

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3
Q

de combien de cell et de bact un individu de 70kg est consitué ?

A

10¹³ cellules et 10¹⁴ bactéries

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4
Q

chaque cell à un génome de combien de paires de bases ?

A

≈ ⒊10⁹

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5
Q

quel est l’élement de fonctionnalité du génome ?

A

la prot => 10 à 20 millons de prot ≠

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6
Q

que va t-on utiliser pour étudier les cell sachant qu’il y a pls structures ds cell et pls types de cell ?

A

on utilise un modèle cellulaire

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7
Q

que permet de décrire le modèle cellulaire ?

A

une cell classique même si il n’en existe pas

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8
Q

la cell c’est l’unité…?

A

structurale et fonctionnelle du vivant

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9
Q

la cell est-elle capabel de vivre isolé ?

A

oui, elle a sa propre homéostasie

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10
Q

que veut dire le terme homéostasie ?

A

capacité d’un système à maintenir l’équilibre de son milieu intérieur, quelles que soient les contraintes externes

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11
Q

que doivent faire continuellemnt les cell ?

A

répondre aux besoins de l’oirgnaisme et être receptive

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12
Q

la cell est-elle capable de se rerpoduire ?

A

oui et peut même s’associer => organismes supérieurs

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13
Q

la cell est-elle un organisme vivant et dynamique ?

A

oui, elles peuvent aussi produire certaines substances qui vont influencer l’organisme

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14
Q

quels sont les outils permettant de pouvoir oobserver la cell puisqu’elle est de petite taille ?

A
  • le microscope optique
  • le microscope électronique
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15
Q

de quoi est à l’origine le MO ?

A

de la théorie cellulaire => = théorie d’organisation d’une popo cellulaire

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16
Q

qu’à permi de définir le ME ?

A

l’ultrastructure des cell et les organtites intracellulaire

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17
Q

que permet de classifié la théorie cellualire ?

A

classification des êtres vivants :
* en procarytoe => abct pas de noyau pas de matériel géntique délimité par mb nuléaire
* eucaryote => noyau contenant le matériel génétique, délimité
par une membrane nucléaire

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18
Q

comment appelle-t-on les animaux eucaryotes unicellualires ?

A

protozoaires

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19
Q

comment appelle-t-on les végétaux eucaryotes unicellulaires ?

A

protophytes

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20
Q

comment appelle-t-on les animaux eucaryotes pluricellualires ?

A

métazoaires =>hommes

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21
Q

comment appelle-t-on les végétaux eucaryotes pluricellulaire ?

A

métaphytes

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22
Q

que va coder un gène ?

A

un message→pour construire prot→assure fonction→réguler gène

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23
Q

quels sont les 3 étapes pour l’isolement des cell ?

A
  1. dissociation mécanique
  2. dissociation enzymatique
  3. identification des cell et enrichissemt des ≠ pop cellulaire
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24
Q

c’est quoi la dissociation mécanique des tissus ?

A

disoociation grossière mais nécéssaire => macroscopique

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25
Q

que permet la dissociation enzymatique = par des prot ?

A

permet d’obtenir cell isolées

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26
Q

quel enzymes on utilise pour dissocier cell de la MEC ?

A

enzymes portéolytiques → digèrenet MES

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27
Q

quel enzyme on va utiliser pour dissocier des cell de jonction ?

A

utilisation agents chélateurs (= emprisonneurs) du Ca²⁺ →dissociation chimique

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28
Q

comment se fair l’identification des cell et l’enrichissement des ≠ pop cellulaire ?

A
  • aux ≠ propriétés physique : taille, adhérence, ensité
  • utilisation d’Ac spécifiques couplés à un support ou à un colorant fluorescent = fluorochrome pour cytomère en flux/trix = FACS
  • à la microdissection laser
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29
Q

quel est le ppe de la centrifugation sur gradie de densité ?

A

séparer les cellules d’un tissu selon leur densité

méthode d’analyse très
fréquente par ex pour analyser les lymphocytes

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30
Q

comment fonctionne la technique Ac couplé à un support ?

A

Ac monoclonal couplé à un support ou à un colorant fluorescent va venir reconnaître un antigène situé à l’extérieur de la cellule

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31
Q

À quoi peut couplé un Ac ?

A
  • collagène
  • colonne de billes de polysaccarides
  • colonne aimantée
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32
Q

que permet la technique : Ac couplé à un support ?

A

repérer un antigène qui doit se trouver à la surface de la cellule
(= sur sa membrane). Elle ne permet pas de séparer des cellules en fonction de ce qu’il y a à l’intérieur de celles-ci :on l’isole

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33
Q

que veut dire FACS ?

A

Fluorescence Acivates Cell Sorter

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34
Q

que permet la cytométrie de flux/ FACS ?

A

d’analyser les cellules
individuellement et de façon automatique
=> comptage possible

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35
Q

que va pouvoir mesurer le FACS ?

A

propriétés optiques :
* taille
* complexité interne de cellules transportées dans un liquide vecteur :flux jusqu’à une source
d’excitation lumineuse :laser

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36
Q

À quoi peut-on associer le FACs ?

A

un trieur pour séparer les ≠ pop cellulaires

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37
Q

que veut dire Laser ?

A

= Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation = photons ≠
électrons

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38
Q

quels sont les avantages de la cytométrie de flux ou FACS ?

A
  • rapidité : 10000cell en qq min
  • application au cell vivante : taille, compléxité interne
  • trier cell en fonction activité cellulaire : suivant angle de diffraction de la lumière qui les traverse
  • haut débit pls milliers de cell
  • intégration de pls paramèter etmarquages multiple
  • cell peuvent être remises en culture
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39
Q

comment est la cell si on a un petit angle de diffraction ?

A

cellule en pleine activité dont la
complexité interne est grande (beaucoup de Golgi et de RE) → beaucoup de
faisceaux sont déviés.

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40
Q

comment est la cell si on a un grand nombre de diffraction ?

A

on a une cellule en activité plus calme dont
complexité interne est plus faible → beaucoup de lumière la traverse

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41
Q

que permet l’intégration de pls paramètre et des marquages multiples ?

A

permettant d’isoler pop très spécifiques→ l’obtent° d’une pop la plus identique
possible permet le transfert sur les malades

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42
Q

comment fonctionnel la cytométrie de flux / FAC ?

A

pop de cell passe ds chambre→emission LASER en fonction exctiation LASER+ incidence sur cell pn détermine ctn nombre d’éléments la concernant

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43
Q

que ce passe-t-il pour le LASER si on utilise un fluorochrome pour une cytométrie de flux?

A

LASER va toucher la cellule marquée et émettre une longueur
d’onde d’émission dans une autre gamme de fréquences → repérage des cellules.

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44
Q

que permet l’utilisation du fluorochrome en sytométrie de flux ?

A
  • L’étude du cycle cellulaire (ex : population tumorale), en prenant en compte la variation de la quantité d’ADN d’une cellule diploïde
  • D’isoler les sous-populations pures et stériles en vue d’autres études (ex : culture
    cellulaire).
  • La quantification et la répartition de sous-populations cellulaires (ex : cellules Natural Killer = cellules qui « tuent » les cellules cancéreuses)
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45
Q

comment on peut réussier à quantifier l’ADN en FACS ?

A

la liaison stœchiométrique entre l’iodure de propidium (= DAPI) et l’ADN ainsi que l’intensité de la fluorescence qui permettent de
quantifier l’ADN de chaque cellule et de repérer la position dans le cycle cellulaire

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46
Q

que permet la microdissection laser ?

A

prélever quelques cellules dans une coupe de tissu et est
utile pour étudier un seul type cellulaire

existe aussi pour prélever quelques cellules sur un tissu vivant

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47
Q

quel est l’inconvenient d’utiliser la microddissection laser ?

A

risque d’abimer le tissu à causes des brülures du laser

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48
Q

pour quel tissu il est inutile d’utiliser la microdissection laser ?

A

sur du tissu hématopoïétique car les cell y sont indépendantes

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49
Q

la culture celluaire c’est quoi ?

A

maintien in vitro des cellules pendant une durée variable

la durée dépend de la nature des cellules

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50
Q

comment peut se faire la culture des cell ?

A
  • milieu classique
  • milieux chimiquement définis sans sérum SVF
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51
Q

c’est quoi un milieux classiques pour la culture des cell ?

A

T° de 37°C, on peut y mettre des substances nutritives élémentaires (eau, acides aminés, glucose, vitamines, sels/ions, oligoéléments) et des suppléments pour la division comme le sérum de veau fœtal SVF (hormones, facteurs de croissance, protéines, lipides, …)

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52
Q

pour quel type de sell on utilise milieux de cultures classiques ?

A

pour des cellules lambda - ex : cellules cancéreuses

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53
Q

pour quelle type de type on utiliser des milieux chimiquement défnins sans sérum ?

A

pour des cellules très
différenciées / difficiles à maintenir en vie

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54
Q

c’est quoi un milieux chimiquement définis sans sérum ?

A

On y met les substances nutritives de base avec de l’insuline, de la transferrine (= protéine transporteuse de fer) et de l’albumine. Des facteurs de croissance spécifiques comme l’EGF (= endothélial growth factor), la *NGF *(= neuronal growth factor) et l’IL-2 (= interleukine 2) font aussi partie du milieu.

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55
Q

que va-t-on ajouter dans les milieux stériles pour cultures des cell ?

A

un indicateur coloré : le rouge phénol.

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56
Q

comment on sait que milieu est acide ?

A

il y a division =>détection d’infection bact car elles produisent acide lactique ->↘︎pH

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57
Q

quel est l’objectif si on fait un élevage dans stérilité ?

A

réinjecter les cellules au patient par
la suite

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58
Q

comment se fait un élevage dans la stérilité ?

A

à 37°C et avec un CO2 à 5% (idem à l’atmosphère)

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59
Q

comment sont manipulés les milieux de culture ?

A

avec un incubateur et sous une hotte

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60
Q

Quand est-ce que les élevages dans la stérilité sont utilisé ?

A

pour la FIV, les vaccins, la thérapie cellulaire, la production de molé ect

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61
Q

que fait-on quand il ya culture primaire ?

A

il s’agit d’aller prélever une cellule dans un organisme pluricellulaire et de
la cultiver in vitro

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62
Q

les cultures prilaires sont elles immortelles ?

A

non , elles tiennent une semaine max => cell soumises phénomène de sénescence ± rapidemnt avec ↘︎÷

sénescence= vieillissement et mort des cell

63
Q

que va-t-on effectuer si on a des cell qui ont du mal à croître ?

A

passage/repiquage nécessaire: on repique les cell ds nouvelle boîte de culture avec un milieu de
culture neuf (= culture secondaire)

64
Q

les cell in vitro expriment-elles les mêmes propiétes de laur tissu d’origine ?

A

oui

65
Q

comment sont les cell normales en cultures ?

A
  • prolifération controlée
  • nbre limité de ÷ voire pas de ÷
66
Q

pourquoi les cell normales en cultue n’ont que voire pas du tout de ÷?

A

raccourcissements des télomères (perte de 40-200 nucléotides par division) qui ne peuvent ainsi plus jouer leur rôle de protecteur de l’ADN

67
Q

que ce passe-t-il quand le télomères devient trop court ?

A

cell l’interprète comme corruption de son ADN et entre alors sénescence(=apoptose).

68
Q

Au bout de combien de ÷ peut avoir lieu la sénescence de la cell ?

A

2 à 3 divisions pour les cellules musculaires,
contre 50 pour les fibroblastes (→ peuvent être utilisés pour une culture secondaire)

69
Q

comment sont les cell cancéreuses en culture ?

A
  • pas de controle
  • pas d’ancrage nécessaire, peu de facteurs de croissa,ce / perte d’inhibition de contact due à dédifférenciation
  • immortelles =>télomérase très active
70
Q

c’est quoi le métastase ?

A

foyer de cell cancéreuse

71
Q

c’est quoi la télomérase ?

A
  • enzyme et un complexe ribonucléoprotéique (protéines + ARN)
  • télomérase humaine est formée de 2 sous-unités
72
Q

quels sont les 2 sous unités de la Télomérase ?

A

TERT (sous-unité protéique) : TElomerase Reverse Transcriptase
- TERC (sous-unité ARN) : TElomerase RNA Component

maintiennent la longueur des télomères

73
Q

les cell isolées à partir de tumeurs peuvent-ells ^tre répiqués de nbrse fois ?

A

oui on peut alors créer des lignées cellulaires

74
Q

quelle est la 1ère lignée cellulaire à avoir été crée à partir de cell cancéreuses ?

A

= lignée HeLa en 1952 =>élaborée à partir cell épithéliales issus d’un cancer du col de l’utérus

75
Q

par quoi peuvent être transformés les cell normales ?

A

virus ou des mutations oncogènes
(= gènes responsables de la division cellulaire) et ainsi devenir immortelles ->évite entrée en senescence

76
Q

les cancer peuvent-ils être dus à des virus ?

A

oui , selon OMS 15 à 20 % des cancers

77
Q

les cultures permettent d’obtenir quoi ?

A

cell en très grand nombre + étudier influence du milieu + intéraction cellulaires gra^ce aux co-culture

78
Q

pourquoi on clone des cell mutantes ?

A

r étudier le contrôle du cycle de division cellulaire (CDC).

79
Q

clone cellulaire

que modèle on peut prendre comme ex de clone cell mutante ?

A
  • les levures des protophyte eucaryotes
  • Le produit du gène mutant est
    fonctionnel à température permissive et non-fonctionnel en conditions restrictives
80
Q

clones cellulaire

pourquoi on utilise l’oeuf de xénope 🐸?

A
  • utilisé pour tester l’impact tératogène des
    médicaments
  • études d’embryogenèse + découverte des anticorps monoclonaux ayant permis une aide à
    l’étude et une utilisation en thérapie
81
Q

quel est la résolution de l’oei nu ?

A

0,2 mm

82
Q

résolution du MO ?

A

0,2 μm donc 200 nm

83
Q

résolution du ME ?

A

2nm en MET et 10nm en MEB pour coupes biologique

84
Q

quelles sont les ordres de grandeurs des ut-nités biologiques structurales ?

A
  • L’atome mesure 0,2 nm (= 2 Å)
  • Le virus, 100 nm (adénovirus plutôt gros / rétrovirus plutôt petits)
  • la bactérie, 1 μm
  • La mitochondrie, 1 μm → facile à voir en MO
  • La cellule eucaryote, 10 à 30 μm (/!\ 5 à 30 μm pour M. Blondel) → on retient une dizaine de microns
85
Q

à quoi correspond la résolution d’une lentille de microscope ?

A

équivaut numériquement à D, c’est-à-dire à la
distance minimale entre 2 objets distinguables

86
Q

comment on peut ↗︎ la résolution ?

A

en utilisant longeurs d’onde inférieures ou C° super de la lumière

87
Q

↗︎ pouvoir de résolution c’est …?

A

↘︎ la limite de résolution

88
Q

que met-on en place pour mieux voir les cell au microscope photoniques ?

A

des coloration sur cell fixées =>inconvénient es conclusions peuvent être erronées) avec ± d’immunomarquage

immunomarquage =tuilisation d’Ac marqués pour identifier une molé

89
Q

quels sont les autres techniques pour pouvoir observer cell vivante en microscope photonique ?

A
  • contraste de phase
  • contraste interférentiel
90
Q

fera-t-on un coupe de tissu pour le MEB ?

A

NON

91
Q

comment faitr pour avoir une vision correcte et pouvoir observer les détails les plus fins ?

A

on ↗︎ résolution et on passe au ME

92
Q

À quoi est proportionnelle la résolution

A

à la longeure d’onde de la radiation utilisée pour interférer avec les structures

93
Q

comment est la longueru d’ondes des e- comparé à celle des photons ?

A

λélectrons (10⁻³ à 1 nm) &laquo_space;λlumière visible ou photons (400 à 700 nm)

94
Q

quelle longueur d’onde correspond à couelur bleue

A

380 nm

95
Q

quelle longeur d’onde correspond à la couleur rouge ?

A

650 nm

96
Q

que ce passe-t-il pour la longueru d’onde plus la vse des e- est élevé ?

A

elle diminue

97
Q

quel est le pouvoir de résolution du MET ?

A

2nm soit x100 MO

98
Q

que permet utilisation d’huile à immersion ?

A

permet **d’augmenter indice de réfraction ** du milieu présent entre le spécimen et la lentille objectif

99
Q

que peut-on voir en en ME ?

A

objets très petits et donne des images avec des
détails voire des représentations en 3D

100
Q

quelle est la préparation pour réaliser pour le MET ?

A
  • fixation
  • coupes très fines

uniquement pour MET car MEB pas de coupes

101
Q

que permet d’observer le MET ?

A

interieur de la cell

102
Q

que va donner le MEB ?

A

des représentation en 3D de entité observée ☞bosses

103
Q

quelle est le grossissemnt du microscope électronique à transmission ?

MET

A

x1 500 jusqu’à x500 000

104
Q

limite de résolution du MET ?

A

2nm

105
Q

comment fonction MET ?

A

on fait passer faisceau d’électrons, dans un environnement « rempli » de vide, à travers une coupe ultrafine (≈ 50 nm) d’un échantillon biologique, contrastée par un
dépôt métallique. Ce faisceau est ensuite agrandi par des électroaimants et vient former une
image sur un écran fluorescent ou sur un film photographique

106
Q

comment est appelée la source dnas le MET ?

A
  • c’est une cathode :e-
  • situés au sommet d’un colonne 1à 2 m
107
Q

que permet le vide ?

A

l’accélération des e-

108
Q

que permettent les bobines magnétiques du MET ?

A

condensent les e-

109
Q

Où est placé l’échantillon dnas le MET ?

A

sur la grille : coloration se fait averc materiau dense aux e- et est sombre pour une déviation pour sutructure biologique

110
Q

quel est el grossissement du microscope électronique à balayage (MEB) ?

A

x20 à x400000

111
Q

limite de résolution du MEB ?

A

≥10 nm

112
Q

profondeur de champ au MEB ?

A

qq mm =>permet effet de relief

113
Q

quel est le ppe du MEB ?

A

électrons sont réfléchis sur l’objet et
repris par un détecteur. Les dessiccations (l’eau est retirée) se font sans rétraction et on y dépose de l’or.

114
Q

comment on prépare un échnatillons pour aller dnas le MEB ?

A
  1. Prélèvement
  2. fixation au glutaraldéhyde
  3. déshydratation à acétone
  4. métallisation avec soit or ou platine
115
Q

que va-t-on observer au MEB ?

A
  • image tridimensionnelle où on observe cell intacte mais morte + constituants cellualires
116
Q

que va-t-on faire si on fait MET par cryofracture ?

A

cell congelée très rapidement à -196°=>azote liquide

117
Q

Pour quel élemnt de la cell on va utiliser Technique de MET par cryofracture?

A

pour les mb cellualire : on sépare les deux hémi-couches de la membrane cellulaire. Sur chaque
moitié, on applique un ombrage et une réplique (visualisation de l’intérieur)

118
Q

que permet l’observation au MET d’une mb ?

A

montre les particules intramembranaires. donc étude de l’ultrastructure des composant cellualires en évitant une partie des artéfact causés par fixation

119
Q

que peut-on voir au ME ?

A
  • constituants intracellulaires (organites, macromolécules spécifiques,
    …)
  • surface de l’échantillon (membrane post-cryofracture)
120
Q

quel est le but du fractionnement sub cellulaire ?

A

séparer, isoler et purifier les organites et les macromolécules, sans les altérer,
pour étudier leurs fonctions.

121
Q

quelle est la 1ère étape à faire pour fractionnement subcellualire ?

A

homogénéise le mélange en rompant la membrane plasmique

122
Q

fractionnement subcellulaire

comment peut-on rompre la mb plasmqie ?

A
  • Choc osmotique (= on joue sur les concentrations en sels) ou ultrasons (= dégraissage agissant sur les lipides).
  • Choc mécanique (Potter).
123
Q

Fractionnement subcellulaire

quelle est la 2ème étape du Fractionnement subcellulaire?

A

centrifuge et ultracentrifuge avec des vitesses croissantes : les constituants de grande taille ou de grande densité sédimentent en premier (noyau → mit → …)

124
Q

c’est quoi le surnageant au bout de 20 min ?

A

mit, lysosomes , peroxysome

125
Q

c’est quoi le surnageant au bout de 60 min ?

A

Fragments de mb , RE fragmenté

126
Q

c’est quoi le surnageant au bout de 3 h ?

A

ribosomes, virus, macromolécules

127
Q

quel est le temps de fragmentation subcelluliare par centrifugation ?

A

cumulé : 10 min+20min+60min+3h= 4h30

128
Q

peut on faire la spération des organite en un seul temps ?

A

oui avec la sédimentation à l’éq => grâce au gradienr de sucrose

129
Q

comment se passe la séparation des organites avec un. gradient de sucrose ?

A

plusieurs couches de sucrose de
densités différentes donc les ≠ organites vont se placer entre les deux couches de
densité voisine par ultracentrifugation

130
Q

Étapes de la séparation avec le gradient de sucrose ?

A
  1. Lyse cellulaire (ultrasons, broyage, choc osmotique, …)
  2. Dépôt du lysat sur gradient de sucrose
  3. Centrifugation à très haute vitesse (ultracentrifugation)
  4. Séparation des différentes structures en fonction de leur densité.
131
Q

comment vont être récupéres les couches lors de la séparation des organite avec gradient de sucrose ?

A

avev aiguille spéciale qui aspire la zone qui nous interesse

132
Q

pour quoi on utilise le gradient de Ficoll ?

A

pour sépare les cell qui composent un tissu => même procédés que pour gradient de sucrose

133
Q

de quoi dépend la centrifugation ?

A

du coeff de sédimentation = vse à laquelle un constituant se sédimente

134
Q

comment s’exprime le coeff de sédimentation ?

A

en Svedberg (S)

135
Q

le coeff de sédimentatione st-il en lie avev le poids moléculaire ?

A

non mais avec taielle et forme des obt

136
Q

le coef de sédimentation est-il additif ?

A

non car :
Pour les ribosomes 80S
* Une grande sous unité à 60S (ARNr 5S, ARNr 28S, ARNr 5,8S et des protéines)
* Une petite sous unité à 40S (ARNr 18S et des protéines).
et 40 S+60 S ≠ 80S

137
Q

combien mesure l’ADN ?

A

1,80 m ce qui correspond à 6.10⁹ nucléotides donc 3.10³

138
Q

quel est la techinque pour analyser l’ADN ?

A

Southern blot

139
Q

quel est la techinque pour analyser ARN ?

A

Northern blot

140
Q

quel est la techinque pour analyser prot ?

A

Western blot

141
Q

comment se déroule les ≠ technique S,W,N blot ?

A
  1. Électrophorèse
  2. transfert sur un flitre par capillarité ->transfert électrique
  3. Hybridation avec sonde spécifique
  4. Révelation
142
Q

c’est quoi l’électrophorèse ?

A

on sépare les composants selon les
poids moléculaires. => les grosses molécules auront plus de mal à migrer que les petites → séparation.

143
Q

que va-t-on utiliser pour la révélation ?

A
  • Une chromatographie (de partage, affinité, …)
  • Une électrophorèse sur gel de polyacrylamide (SDS PAGE) en 2 dimensions (poids
    moléculaire et pHi = pH isoélectrique)
  • Un séquençage des protéines (cristallographie ou RMN) → révèle la forme et donc la
    fonction (car elles sont liées)
144
Q

comment est estimé le poids moléculaire de ADN et ANR ?

A

par électrophorèse sur gel

145
Q

comment on va étudier les cell vivante ?

A

avec prot chiméres fluorescente

146
Q

comment on va étudier les cell vivantes avec des prot chimères ?

A
  • construction gène codant pour prot d’intérêt en ajoutant GFP =>prot fluo
  • transfection
  • gène ensuite transcrit en ARNm et traduit en prot dnas le REG
  • permet visualisation cellulaire grâce à la GFP svt au microscope confoncal
147
Q

Étude des cellules vivantes

Les protéines chimères

comment fonctionne la tras-nsfection ,

A

on introduitle gène codant et la GFP ds cell avec vecteur car besoin d’aidepour passer comme prot , ADN et mb chargée négativement

Green Fluorescent Protein ; issue d’une
méduse

148
Q

que permettent les précurseurs ?

A

des études cinétique

149
Q

comment peuvent être les précurseurs ?

A
  • radioactifs : on les révelent ar autoradiographie
  • ou autre ex: fluorochromes
150
Q

précureseurs radioactifs ?

A
  • Le ³H-thymidine : l’ADN est synthétisé dans le noyau et y reste
  • Le ³H-uridine : l’ARN est synthétisé dans le noyau et migre dans le cytoplasme
    (pas d’uridine dans l’ADN)
  • ³H-leucine : « pulse-chase » des protéines du RE vers le Golgi (sécrétion)
151
Q

quel est le nom de la méthode quand on utilise un flux d’ions à travers les mb ?

A

” patch-clamp “

152
Q

comment on réalise la méthode du patch-clamp ?

A

utilise une pipette en verre (Ø < 1 μm) posée à la
surface d’une cellule et on isole un « patch » (canal ionique).

153
Q

une fois qu’on a isoler le patch que fait-on ?

A

électrodes sont reliées à un système d’enregistrement qui prend en compte les variations de tension imposées. S’il y a un passage d’ions, il y a un potentiel de membrane. Cela précise les conditions électro-physiologiques pour l’état d’ouverture ou de fermeture des canaux
ioniques (flux ioniques).

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