Práctica 7: Electroforesis - RFLP Flashcards
(20 cards)
¿Qué es la electroforesis?
Es una de las herramientas moleculares fundamentales para aislar y purificar macromoléculas en base a su movilidad dentro de un soporte o matriz sólida en un campo eléctrico
¿Que tipo de macromoléculas podemos analizar en la electroforesis?
Ácidos nucleicos y proteínas
¿Cómo identificar ácidos nucleicos de distintas procedencias en la electroforesis?
Por diferencias en sus corrimientos electroforéticos y su integridad o ausencia de degradación
¿Que tipos de tinciones de DNA podemos utilizar?
Fast Blast y Bromuro de Etidio
¿Cuál es el principio de la tinción Fast Blast?
La tinción contiene un compuesto catiónico colorido que se une a los grupos fosfato cargados negativamente del DNA a pH ligeramente básico
¿Cuál es el principio de la tinción Bromuro de Etidio?
Se intercala entre las bases y permite detectar hasta 1 ng de DNA de doble cadena
¿Cuál es la longitud de onda de la fluorescencia de Bromuro de Etidio?
560 nm bajo luz ultravioleta (260-360 nm)
¿Cuál es la característica del gel de agarosa?
Se trata de una agarosa solidificada que forma una matriz que contienen poros que varían de tamaño según la concentración de agarosa
¿Que debemos aplicar para que haya movimiento a través del gel?
Una corriente eléctrica
Además de la corriente eléctrica y el gel ¿Hay algún otro componente para que se lleve a cabo el movimiento electroforético?
Un buffer salino
¿Hacia donde migrarán las moléculas de DNA?
Hacia el ánodo positivo
¿Cómo se expresa el tamaño de una molécula de DNA?
Como su peso molecular que se expresa en el número de pb que forman la molécula
¿Que moléculas presentan menor movilidad electroforética?
Las de mayor peso molecular que quedarán más cerca del pozo y aparecerán en el gel como las bandas más superiores
¿En que condiciones las moléculas de DNA tardarán más en atravesar los poros del gel de agarosa?
Cuando la concentración del gel sea mayor ya que menor será el tamaño de los poros
¿Cuál es la concentración del gel de agarosa usada en la práctica?
Del 1%
¿Que moléculas permite separar la agarosa al 1%?
Fragmentos entre 500 y 10000 pb
¿Cómo se verá en el gel de agarosa los RFLP?
Cada una de las muestras provenientes de los distintos individuos mostrará un patrón de bandas característico
¿Únicamente analizamos los fragmentos de restricción
No, también un marcador de peso molecular
¿Cómo podemos determinar el peso molecular de nuestros fragmentos de restricción?
Comparando la migración de las bandas en una muestra de DNA digerida con las bandas en el carril del marcador de peso molecular
¿Cómo deben ser los RFLP de una persona con relación a sus padres?
Puede tener fragmentos de restricción de ambos
