Práctica 8: PCR Flashcards
(27 cards)
¿Que es la PCR?
Es una herramienta molecular altamente sensible que puede amplificar selectivamente, esto es, producir cantidades exponencialmente grandes de una secuencia específica de DNA a partir de trazas o cantidades muy pequeñas de material genético genético denominado plantilla o molde de DNA
¿Cuál es un sinónimo de la reacción en cadena de la polimerasa?
Clónación in vitro
¿Cuáles son las aplicaciones de la PCR en la investigación médica?
Identificación de agentes patógenos verificando la presencia o ausencia de su material genético además del diagnóstico de polimorfismos asociados a enfermedades, medicina forense, pruebas de paternidad, etc
¿Quién desarrolló la técnica de PCR?
Kary Mullis en 1985
¿Que es lo mínimo que necesita la PCR del material genético?
Una única hebra intacta de DNA molde
¿Puede ser cualquier forma de DNA de doble cadena?
Cualquier forma que se presente en una mezcla compleja de moléculas de DNA sin purificación previa
¿Cuáles son los componentes de la PCR?
- Buffer de reacción que mantiene un pH de 8.0 y contiene MgCl2 como cofactor enzimático
- dNTPs para incorporarse a las nuevas cadenas de DNA
- DNA polimerasa termoestable
- Dos oligonucleótidos (cebadores o primers)
- DNA molde que contenga la secuencia blanco que se desea amplificar
¿Que podemos considerar como “contaminación” en la reacción de PCR?
Toda la secuencia que no es de nuestro interés
¿Cuáles son los tres principios moleculares que conforman un ciclo de PCR?
- Desnaturalización
- Alineamiento
- Extensión
¿Que pasa durante la fase de desnaturalización?
Rompimiento de los puentes H, lo que generará cadenas sencillas
Se logra incrementando la temperatura
¿Que sucede durante la fase de alineamiento?
Ocurre la hibridación del primer a la secuencia específica del DNA molde (Práctica 11: La temperatura a la que esto ocurre es en la que hay una complementariedad perfecta entre el DNA molde y el primer)
¿Cuáles son las fases de la PCR?
Exponencial, lineal y plateau
¿Cuántas moléculas de DNA habrá al final de 35 ciclos a partir de una sola hebra?
2^35 moléculas
¿Cuáles son las temperaturas de las etapas del ciclo de la PCR?
Desnaturalización a 94°C
Alineamiento a 52°C
Extensión a 72°C
¿Cuál es la función del termociclador?
Calentar, enfriar y mantener a distintas temperaturas rápidamente por periodos programables de tiempo a través de un número determinado de ciclos
¿Podemos directamente analizar el producto de la PCR después de finalizados los ciclos programados del termociclador?
No, primero debemos almacenar la muestra a 4°C para detener la reacción y que después sean analizados
¿Cuántos pb tiene el genoma humano?
3,500 millones de pb
Sabemos que el genoma es 99.9% idéntico entre todos los individuos de una misma especie pero el 0.01% que difiere ¿Dónde se encuentra algunas de estas secuencias?
En regiones (loci) de nuestros cromosomas que no controlan ningún rasgo conocido ni tienen funciones específicas
¿Qué son los loci?
Direcciones o ubicaciones genéticas
¿Cuántas formas tienen los locus?
Puede tener diferentes forma o tipos llamados alelos
Un locus puede ser bi-alélico con dos formas diferentes o polimórfico con muchas formas
¿Qué es la huella genética?
Es el genotipo de una muestra individual de DNA
¿Qué es el genotipo?
Es el conjunto particular de variaciones genéticas polimorfismos o alelos
¿En que otro caso las huellas genéticas de dos muestras biológicas coinciden además de que puedan provenir de la misma persona?
Que puedan provenir de gemelos homocigotos
¿Que contienen las secuencias polimórficas empleadas para la determinación de la huella genética?
Segmentos de repeticiones cortas en tándem o STR
