Repro

Question 1

Indicacion tranferancia embryonaria

Answer 1

• Aptitud de la yegua
• Incapacidad fisica de parir (hernias abdominales, rotura del tendon prepubico, laminitis cronica)
• Limitaciones reproductivas (endometriosis, endometritis subclinica cronica…)
• Economica / prod (++ protos por año/yegua). Limitaciones de registro en los libros genealogicos

Question 2

Tipos de TE

Answer 2

• Transferencia de embriones frescos
• Transferencia de embriones refrigerados

Transferencia de embriones vitrificados
* Exito aceptavle solo en embriones sin capsula (morula o blastocisto temprano
* Necesidad de recuperarlos temprano (6-6,5 dias post ovulacion)

Question 3

Técnica de TE
(Sin superovulación)

Answer 3

1. IA / Monta natural a la yegua donante con el semental deseado
2. Lavado uterino con 3L de RL 8-9 dias post-ovulacion (para TE embriones frescos) o 6-7 dias (para vitrificar embriones)
3. Paso del fluido recuperado por un filtro con orificios de 75um
4. Buscar embrión en catéter de transferencia o vitrificar
5. Introducir embrión en catéter de transferencia o vitrificar
6. Transferir embrión via cervical (depositarlo en cuerpo uterino) en una yegua receptora que ha ovulado entre 1 dia antes y 4 después de la donante.

La yegua donante esta en diestro!

Circuito cerrado : Sonda folley, tubuladura de entrada y salida (Yà que conecta la sonda con los conectores, uno al RL y otro al envase de recogida con filtro de 75uM, y la probeta

Question 4

Condiciones para buscar al embrion con lupa

Answer 4

• Camara de flujo laminar horizontal con filtros HEPA
• NUNCA usar luz UV xq daña el ADN
• Usar luz fria y de baja potencia en la lupa
• T° 32 - 37°

Question 5

Como cargar el embrion en la pajuela de transferencia ?

Answer 5

Medio-aire-medio+embrion-aire medio

Question 6

Transferir embrion
Como sincronizamos a la receptora ?

Y tecnicas de transfer

Answer 6

• Teniendo un numero 3 veces mayor de receptoras que de donantes
• Revisiones cada 3 días (3 veces x semana) para diagnosticar el momento de la ovulación
• Revisiones diarias de la donante (desde el celo al flushing)

Si solo tenemos 1 receptora para 1 donante :
* Las mantendremos en diestro con Progesterona durante 10d
* Romperemos los CL con prostaglandinas F2a
* Induciremos la ovulacion (hCG o Buserelina)

Question 7

Diagnóstico de gestación de la receptora

Answer 7

• 7 dias después de la transferencia
• Si es negativo, la receptora puede volver a usarse
• Si la receptora pierde 3 veces la gestación se descarta!

Question 8

Problemas de fertilidad en la yegua :
Principales causas (6)

Answer 8

• Trastornos de la ovulacion
• Endometritis infecciosas (bacterianas y fungicas)
• Endometritis inducida por el servicio o por el coito
• Edad avanzada (>15 años)
• Alteraciones utero-tubáricas no infecciosas
• Alteraciones del desarrollo / genéticas

Question 9

Edad avanzada : (5)

Answer 9

• Utero péndulo, pb de contractibilidad y drenaje via cervix y linfatico
• Mala conformacion perineal (endometritis/pneumoutero)
• Endometriosis (quistes endometriales, areas aglandulares)
• Aumento de intervalos inter-ovularios : atrofia endometrial estacional
• Mala calidad de ovocitos

Question 10

Alteraciones Utero-tubaricas no infecciosas

Answer 10

BLOQUEO DE OVIDUCTO

• Desarollo de masas de colageno dentro del oviducto
• Predisposicion de yeguas de edad avanzada >15 años
• Causa infertilidad temporal o permanente : por obstrucción del paso del oviducto para realizar la fecundación. Suele ser bilateral.
• Sospechar si : la ovulación es normal, semental fértil, ausencia de fluido uterino poscoital, citologias y cultivos negativos, pero la yegua no se preña durante una o más temporadas

TTO :
* Aplicacion de PGE2 intra y sobre la musculatura oviductal (via laparoscopica)
* Cirugia laparoscopia : Sedacion : detomidina + butorfanol
* Anestesia epidural (mepivacaína)

Question 11

Alteraciones del desarrollo/genéticas

Answer 11

Todos los casos originan infertilidad permanente

Tipos :
* Hermafroditismo verdadero : testiculo y ovario (ovotestes) en un individuo
* Pseudohermafroditismo masculino : solo presencia de tejido testicular en un individuo con fenotipo hembra. MAS COMUN.
* Pseudohermaroditismo feminino : solo tejido ovárico en un individuo con fenotipo macho.

Question 12

Pseudo hermafroditismo masculino

Answer 12

Clinica :
* Apaciencia externa de hembra (fenotipo)
* Caracter dominante de semental
* Clitorix muy desarrollado (con o sin uretra)
* Atrofia de labios vulvares
* Ausencia de útero y ovarios
* Presencia de testiculos criptorquidos (abdominales o inguinales)

DX :
* Exploracion externa y transrectal
* Ecografia
* Endoscopia vaginal
* Extraccion de sangre para realizar el cariotipo

Consecuencias :
* Innecesario comportamiento de semental
* Posibles torsiones del cordon testicular (dolor colico)
* Posible desarrollo de tumores testiculares

TTO : castracion quirurgica por laparotomia
Pronostico bueno!

Question 13

Grados de fertilidad semental

Answer 13

• Fertil
• Subfertilidad :
• Moderada : preña al 50% de la yeguas que monta
• Marcada : 10-30%
• Infertilidad temporal (ej. fiebre)
• Esterilidad permanente.

Question 14

Como se puede medir la fertilidad ?

Answer 14

1. Tasa de preñez en la temporada (numero de yeguas preñadas al final de la temporada/numero de yeguas cubiertas)
2. Tasas de preñez total por ciclo (numero de ciclos que acaban en preñez / número total de ciclos cubiertos)
3. Tasas de preñez de primer ciclo (número de 1° ciclos de una yegua que acaban en preñez / numero total de primeros ciclos cuibiertos)

Question 15

Problemas eyaculatorios

Answer 15

1. Retraso eyaculatorio (no es patologico) : sementales “especiales” con preferencias o manías
2. Fallo eyaculatorio (patologico) : dolor fisico o bloqueo de ampollas
3. Alteraciones eyaculatorias (patologico) : urospermia o hemospermia

Question 16

Sementales inexpertos lentos (timidos)

Answer 16

Reconocimiento de signos indicativos : miedo, defecacion, bostezo, auto-lamido, juego con la yegua

TTO :
* Intentar reproducir las condiciones de monta “naturales”
* Utilizacion de yeguas con celo muy marcado
* Farmacos que aumenan la libido : análogos de la GnRH (favorece produccion T4) como la Buserelina.
* Ansioliticos : diazepam o imipramina

Question 17

Semental expertos lentos

Answer 17

• Descartar dolores/patologias musculoesq
• Ver condiciones de manejo
• Farmacos que disminuyen el umbral eyaculatorio :
• Imipramina
• Imipramina+xilacina (bajo volumen ++ concentrado)
• Farmacos que aumentan la libido : analagos de GnRH

Question 18

Evaluacion del eyaculado : fertilidad intriseca

Answer 18

Motilidad :
* Rango (aceptable): >60% de Motilidad Total
* Rango (aceptable): >40% de Motilidad progresiva

Morfologia : > 60% moforlogicamente normales$
* Primarias / Secundarias / Terciarias
* Incompensables : alteraciones de la estructura interna

Cuando aparatamente normal :
Citometro de flujo y microscopio de epifluorescencia

Utilisar CASA, computer assisted Semen Analysis

Causas de reduccion en motilidad :
* Fisiologicas (pubertad, desuso)
* Enfermedad sistémica (fiebre durante > 24-48h)
* Bloqueo de Ampollas
* Degeneración testicular (edad avanzada)
* Plasma seminal “toxico” (infección seminal o de glándulas accesorias, hemoespermia, uroespermia)
* Mal manejo/procesamiento : sustancias toxicas, exceso/falta temperatura durante la evaluacion, etc…

Question 19

Oligoespermia
Motilidad reducida / morfoanomalias
Alteracion de membranas, potencial mitocondrial, acrosoma…

TTO :

Answer 19

Procesamiento seminal :
* Centrifugación estándar
* SLC (single layer centrifugation)
* DLC (double laer centrifugation)

Tecnicas de reproduccion asistida :
* ICSI (inyección intracitoplasmatica de spz)
* GIFT (transferencia infrafalopiana de gametos)

Question 20

Ecografia de glandulas accesorias

Answer 20

Question 21

Bloqueo de ampollas

Answer 21

• Relativament frecuente en sementales viejos
• Azospermia + espermiostasis(acumulo spz en epididimo y ampolla)
• Fosfatasa alcalina (ALP) < 1000 UI/L

Question 22

Fallo eyaculatorio
TTO

Answer 22

• 20 UI de oxitocina IV o IM
• Masaje rectal durante 5-10 minutos
• Extracciones de semen diarias : 2 veces/dia
• Una vez desbloqueado, el eyaculado tiene concentraciones muy altas (600-1000 x10^6/mL, baja motilidad y muertos)
• Frecuencia : diariamente hasta que se resuelva el problema y luego continuar con 2 extracciones por semana min
• Pronostico : bueno pero recidiva

Question 23

Pruebas de longevidad seminal
Refrigeracion

Answer 23

Question 24

Inseminacion artificial con bajo volumen

Answer 24

• Dosis estandar 20-40 mL | 1000 x10^6 spz
• Bajo volumen < 5mL | 100 x 10^6 spz
• Need IA profunda o IA histeroscopica

Histeroscopica :
* IA post ovulacion : 36-44h depues hCG / buserelina
* Paso del endoscopio a través del cérvix y hasta la papila oviductal (se requiere insuflar el utero con aire)
* Aspiracion semen a través de un catéter en el canal de trabajo y posterior deposito en la papila o ampolla

Question 25

Inseminacion artificial con bajo volumen
Semen sexado

Answer 25

• Hembras en la disciplina de polo
• Machos en concursos morfologicos
• Citometro de flujo para sexaje de semen : SORTER
• Solamente 13% yeguas
• Coste ++ elevado

Question 26

Transferencia de ovocitos y OPU (Ovum Pic Up)
General

Answer 26

• 80% de tasas de recuperacion de ovocito/foliculo aspirado
• Yegua donante de alta calidad genetica
• Foliculos preovulatorios o en crecimiento

Indicaciones :
* Endometritis cronicas refractarias (piometra)
* Adherencias uterinas o endormetriosis severa
* Laceraciones cervicales irreparables
* Alteraciones oviductales

Tecnicas :
* Aspiracion transvaginal ecoguiada : ovum pick up (OPU)
* Aspiracion a través del flanco

Cultivo y maduracion :
* Ovocitos inmaduros in vitro con FSH y LH. Incubadora a 38,5° y 5% de CO2 (24-30h)
*

Question 27

OPU (Ovum Pic Up)
Descripcion de la tecnica :

Answer 27

• Sedación de la yegua donante (xilacina)
• Anestesia epidural caudal (mepivacaina)
• Sondaje uretral - lavado y desinfeccion…
• Canal de trabajo : via vaginal
• Manipulacion ovarios via rectal
• Aspiara el liquido folicular
• Lavado con fluido + anticoagulante

Question 28

Transferencia de ovocitos
Yegua receptora, tecnica

Answer 28

• Induccion 30h antes de la transferencia (buserelina o hCG)
• IA con semen fresco o refrigerado 10h antes
• Manejo rutinario post IA
• Cirurgia ! en estacion
• Sedacion : **detomidina + butorfanol **
• Epidural : mepivacaina
• Exteriorizacion del ovario
• Aspiracion previa de su propio ovocito y posterior transferencia del de la donante

Question 29

ICSI (Intracytoplasmic sperm injection)

Answer 29

• Yeguas de alta valor que no puede ser preñada y semental subfertil
• No hace falta cirugia y solo 1 spz
• Coste elevado y tecnico!

Foliculos :
* En desarrollo : 5 ovocitos/9 foliculos/yegua | Maturacion
* Preovulatorio : 0,8 ovocitos/foliculo/yegua
* Yeguas muertas : 18 ovocitos/yegua | Maturacion

Tecnica :
* Microscopio invertido con pletina termica
* 2-3 spz -> en zona limpia -> elegimos el mejor en microinyector
* Fijamos el ovocito con el micromanipulador : corpusculo polar a las 12 o 6
* Inyectemos el spz dentro sin danar membranas ovocito
* Incubacion 38,5°C y 5% de CO2 durante 8 dias (blastocitos expandido)
* TE en la yegua receptora

Question 30

GIFT
Gamète Intrafallopian tube transfer

Answer 30

• Indicaciones : misma que antes
• El ovocito y spz son transferidos al oviducto de la yegua receptora
• Origen ovocito : OPU, a traves flando o ovario yegua muerta
• Origen spz : baja dosis seminal (fresco o refrigerado) o pajuela congelada
• Mismo procedimiento quirurgico que en TO
• menos eficiente que la TO

Question 31

Resumen
TO / GIFT / ICSI

Answer 31

Eficiencia calidad/precio :
* 1° TO
* 2° la GIFT
* 3° la ICSI

Se utilizan cuando
* yegua y semental alta calidad
* yegua donante no consigue gestacion a término o temprana
* En ICSI y GIFT - semental subfertil o muerto

Question 32

Clonación

Answer 32

• Primer : mula en 2003 mismo año una potra
• 400 caballos desde
• Tres laboratorios que lo hacen
• Eficiencia 25%
• • enfermedades de neonatos
• aplicacion clonacion de machos castrados excellente.
• Raza mas clonada = polo argentino

Tecnica :
* Dejar madurar ovocitos hasta metafase II (16-26h)
* Enuclear, extraer el material genetocp del ovocito mediante micromanipuladores
* Introducir nuevo materia animal que queremos clonar
* Descarga electrica -> mitosis y meiosis 8dias blastocisto expandido
* TE a la yegua receptora

Question 33

Fecundacion in vitro :

Answer 33

• No funciona en caballo!
• Investigacion
• Pb : resolver la in,duccion de la capacitacion del spz e incapacidad de penetrar la zona pelucida del ovocito.