chp10 Flashcards
(18 cards)
Compare the mobile and static phase of RPLC and HPLC
slide 5
Describe the mobile and static phase of RPLC
- Η στατική φάση
—> είναι λιγότερο πολική από την κινητή φάση
—> μπορεί να είναι C3, C8, C18 κ.α (υδρογονανθρακική αλυσίδα με 18 άνθρακες) - κινητή φάση
—> είναι ένας πολικός διαλύτης
—> όπως μεθανόλη, ακετονιτρίλιο, κλπ
—> ή μίγματα με νερό
Which compound comes out first for RPLC
Η περισσότερο πολική ένωση εκλούεται πρώτα
—> ενώ η λιγότερο πολική ένωση θα διατηρηθεί περισσότερο μέσα στη στήλη
Is RPLC used often
RPLC είναι η πιο κοινή τεχνική στην Υγρή Χρωματογραφία και διάφορες εκδόσεις και τεχνικές είχαν προκύψει από RPLC με κάποια τροποποίηση της κινητής φάσης
Explain the mechanism of RPLC
- Αύξηση του ποσοστού του οργανικού τροποποιητή σε κινητή φάση μειώνει το χρόνο κατακράτησης του λιγότερο πολικού
—> αφού μειώνει την πολικότητα της κινητής φάσης - Αντίθετα, η αύξηση της πολικότητας της κινητής φάσης αυξάνει το χρόνο κατακράτησης της λιγότερο πολικής διαλυμένης ουσίας και μειώνει το χρόνο κατακράτησης των περισσότερο πολικών διαλυμένων ουσιών
List specific examples of static and mobile phases for RPLC
- Στατική φάση (Μικρή πολικότητα)
- Octadecyl group-bonded silical gel (ODS)
- Κινητή φάση (Μεγάλη πολικότητα)
- Νερό
- μεθανόλη
- ακετονιτρίλιο
- Κάποιες φορές προστίθονται άλατα
Compare regular vs reverse phase LC
- Στη χρωματογραφία κανονικής φάσης
- το λιγότερο πολικό συστατικό εκλούεται πρώτο
- γιατί είναι το πιο διαλυτό στην κινητή φάση
- Αυξάνοντας την πολικότητα της κινητής φάσης έχει ως αποτέλεσμα τη μείωση του χρόνου έκλουσης
- RPLC
- το πιο πολικό συστατικό εμφανίζεται πρώτο
- αυξάνοντας την πολικότητα της κινητής φάσης ο χρόνος έκλουσης μειώνεται
Why is the μήκους της αλυσίδας στην RPLC important
Καθώς το μήκος της υδρογονανθρακικής αλυσίδας της στατικής φάσης αυξάνεται, οι χρόνοι κατακράτησης των λιγότερο πολικών ενώσεων αυξάνονται
—> Η αύξηση του μήκους της υδρογονανθρακικής αλυσίδας της στατικής φάσης ελέγχει το μέγεθος του δείγματος
—> Η στατική φάση C3 μπορεί να χρησιμοποιηθεί για διαχωρισμό ενός μεγέθους δείγματος περίπου ήμισυ μέγεθους σε σχέση με τη στατική φάση C8.
Name the main column types used in RPLC
MAIN —> C18 (ODS) type
- C8 (octyl) type
- C4 (butyl) type
- Phenyl type
- TMS type
- Cyano type
List common solvents for RPLC
- Μεθανόλη
- Ακετονιτρίλιο
- Τετραϋδροφουράνιο
- Water
List static and mobile phases for normal HPLC
- Στατική φάση
- Silica gel —> -Si-OH
- Cyano type —> -Si-CH2CH2CH2CN
- Amino type —> -Si-CH2CH2CH2NH2
- Diol type —> -Si-CH2CH2CH2OCH(OH)-CH2OH
- Κινητή φάση
- Βασικοί διαλύτες:
—> Αλειφατικοί υδρογονάνθρακες
—> αρωματικοί υδρογονάνθρακες κ.α. - Επιπρόσθετοι διαλύτες
—> Αλκοόλες
—> αιθέρες, κ.α.
Compare the retention time in normal vs reverse LC with low vs medium polar solvents
slide 14
Explain the different bonding that happens with the column and how different polarities affect the Rt in RPLC
The column is a hydrocarbon chain
—> the longer it is the stronger the bonding
—> C18 > C4
If the substance is non- polar (eg aromatic ring + methyl)
—> binds strongly with ODS
—> comes out later = longer Rt
If the substance had a polar group such as OH or NH2
—> it forms weak bonds with ODS
—> smaller Rt so comes out first
Explain the bonding that happens in regular LC and how it affect Rt
The regular LC has polar columns such as SiOH
—> stronger bonding with polar substances
—> weaker bond with non-polar substances
—> the less obstruction in the chemical structure there is, the better it can bind with the polar group (eg OH)
The stronger the binding the slower the Rt
Explain the σχέση μεταξύ της πολικότητας του διαλύτη και
του χρόνου κατακράτησης στην κανονική φάση vs RPLC
If the εκλουστικό is εξάνιο/μεθανόλη in regular LC
—> we want 98 / 2
—> best separation and clearest peaks
If the εκλουστικό is Μεθανόλη / Νερό in RPLC
—> we want 70 / 30
—> better bc less polar better sep —> less analysis time
Summary comparison of regular vs reverse LC
- Κανονική φάση
- Αποτελεσματική για το διαχωρισμό των δομικών ισομερών
- Προσφέρει επιλεκτικότητα διαχωρισμού όπου δεν είναι διαθέσιμη η ανάστροφη φάση
- Σταθεροποιείται αργά και είναι επιρρεπής σε διακυμάνσεις του χρόνου κατακράτησης
- Τα εκλουστικά είναι ακριβά
- Αντίστροφη φάση
- Ευρύ φάσμα εφαρμογών
- Αποτελεσματική για το διαχωρισμό των ομολόγων
- Η στατική φάση έχει μεγάλη διάρκεια ζωής
- Σταθεροποιείται γρήγορα
- Εκλουστικά είναι φθηνά και είναι εύκολη στη χρήση τους
Name and describe the Βασικές ρυθμίσεις για εκλουστικά που χρησιμοποιούνται στην RPLC
Components
- Νερό (ή ρυθμιστικό διάλυμα)
- Νερό-διαλυτός οργανικός διαλύτης όπως:
—> Μεθανόλη
—> Ακετονιτρίλιο
—> Τετραϋδροφουράνιο (THF)
Κύρια ρυθμιστική παράμετρος:
—> Ο λόγος ανάμιξης νερού/οργανικού διαλύτη επηρεάζει σημαντικά την επιλεκτικότητα και χρόνο κατακράτησης.
—> Αν χρησιμοποιείται ρυθμιστικό διάλυμα, το pH αποτελεί κρίσιμο παράγοντα για τον διαχωρισμό, ειδικά για ιονιζόμενες ενώσεις.
List different parameters that can affect the results of RPLC
- Παραμέτροι στήλης
- Υλικό στήλης
- Απενεργοποίηση
- Στατική φάση
- Υλικό επίστρωσης
- Παράμετροι οργάνου
- Θερμοκρασία
- Ροή
- Σήμα
- Ευαισθησία δείγματος
- Ανιχνευτής
- Παράμετροι δείγματος
- Συγκέντρωση
- Υπόστρωμα
- Επίδραση διαλύτη
- Επίδραση δείγματος
