chp13

Question 1

what type of molecules can be separated using size exclusion chromatography

Answer 1

Πρωτεΐνες/πεπτίδια (ενώσεις μεγάλου μοριακού βάρους)

Question 2

Describe the process of size exclusion chromatography (structure / mechanism / result)

Answer 2

Structure:

• διαχωρισμός γίνεται σε μια χρωματογραφική στήλη
• περιέχει πορώδες υλικό

Mechanism:

• Όταν ένα μεγαλομόριο/πολυμερές εισέλθει στη στήλη, διαπερνά μέσα στους πόρους της πηκτής
• ανάλογα με το μέγεθος του και την κατανομή της διαμέτρου των πόρων των σωματιδίων του προσροφητικού υλικού

Result:

a) Τα μικρότερα πολυμερή μόρια
—> εγκλωβίζονται στο εσωτερικό μέρος των σωματιδίων (πόρους)
—> διανύουν μεγαλύτερη διαδρομή
—> με αποτέλεσμα να έχουν μεγαλύτερο χρόνο κατακράτησης (μεγαλύτερος χρόνος στη στήλη) σε σύγκριση με τα μόρια μεγαλύτερου μεγέθους

b) Τα μεγαλύτερα μόρια
—> διεισδύουν σε μικρό ποσοστό στους πόρους του υλικού πληρώσεως ή αποκλείονται τελείως
—>Τα μεγαλύτερα μόρια εξέρχονται από τη στήλη πρώτα και τα μικρότερα μόρια τελευταία

Question 3

what was the old name for this technique

Answer 3

Χρωματογραφία Διήθησης ή Διάχυσης Πηκτής (Gel Filtration ή Gel Permeation Chromatography)
—> Χρησιμοποιούνται πορώδη υλικά για το διαχωρισμό μορίων διαφορετικού μεγέθους

Question 4

What’s the static vs mobile phase

Answer 4

• Static phase —> Υδρόφοβες πηκτές (ρητίνες από συμπολυμερισμό πολυστυρενίου διβινυλοβενζολίου)
• Κινητή Φάση —> Οργανικοί διαλύτες

Question 5

Give the main applications for SEC

Answer 5

1. Διαχωρισμός βιολογικών μορίων (π.χ. ανάλυση ενζύμων, πολυσακχαριτών, νουκλεϊκών οξέων, πρωτεϊνών και άλλων βιολογικών μακρομορίων)
2. Στον προσδιορισμό του μοριακού βάρους και στο χαρακτηρισμό πολυμερών υλικών

Question 6

Explain what’s the main mechanism that allows for separation in SEC

Answer 6

Καθορίζεται από τους όγκους μέσα στη στήλη

1. Όγκος Α
   = ο κενός χώρος και καταλαμβάνεται από την υγρή κινητή φάση μεταξύ των σωματιδίων της στατικής φάσης.
2. Όγκος Β
   = η υγρή φάση μέσα στους πόρους της στατικής φάσης.
3. Όγκος Γ
   = ο όγκος της στερεάς στατικής φάσης.

—> Στον Όγκο Α έχουν πρόσβαση όλα τα μόρια ανεξαρτήτου μεγέθους, ενώ στον Όγκο Γ κανένα μόριο.
—> Στον Όγκο Β η πρόσβαση των μορίων εξαρτάται από το μέγεθος των μορίων και τις διαστάσεις των πόρων του προσροφητικού υλικού

Question 7

What path do different sized molecules take?

Answer 7

• Τα μόρια μεγάλου μεγέθους
  —> εξέρχονται με τον όγκο Α
  —> γιατί δεν διεισδύουν μέσα στους πόρους.
• Τα μόρια με μεσαίο μέγεθος
  —> διεισδύουν μερικώς στους πόρους
• Τα μόρια μικρού μεγέθους
  —> εισέρχονται πλήρως στους πόρους

Question 8

what factors affect the Επιλογή Στήλης

Answer 8

1. το μέγεθος των σωματιδίων που θα διαχωριστούν
2. τις ιδιότητες τους

Question 9

Give 2 examples of applications for SEC

Answer 9

1. Διαχωρισμός Πρωτεϊνών

• μίγμα —> γλουταμινικής αφυδρογονάσης, της γαλακτικής αφυδρογονάσης, αλβουμίνης ορού, οβαλβουμίνης και του κυτοχρώματος c

Result
a) Γλουταμινική αφυδρογονάση εκλούεται πρώτη.
b) Κιτόχρωμα τελευταίο
c) Οι υπόλοιπες πρωτεΐνες εκλούονται με σειρά μείωσης του μοριακού βάρους

2. Καθαρισμός δείγματος από λιπίδια, πολυμερή, συμπολυμερή, φυσικές ρητίνες, στεροειδή, διάφορες ενώσεις μεγάλου μοριακού βάρους
   —> Εφαρμόζεται τόσο για πολικές όσο και για μη πολικές ενώσεις