lecture 2 Flashcards
(13 cards)
how is the separation achieved during chromatography + explain the scientific basis
Ο διαχωρισμός πετυχαίνεται με κατανομή συστατικών μεταξύ 2 φάσεων:
- μιας στατικής
- μιας κινητής φάσης
—> βρίσκονται σε μια χρωματογραφική στήλη
How?
βασίζεται στις διαφορές που υπάρχουν σε κάποιες ιδιότητες των συστατικών ενός μίγματος
—> όπως το σημείο ζέσεως, η πολικότητα, τα ηλεκτρικά φορτία (για ιονικές ενώσεις), το μέγεθος των μορίων και άλλα
—> Οι διαφορές αυτές διαφοροποιούν τη σχετική φυσικοχημική συγγένεια κάθε συστατικού προς τις 2 φάσεις της χρωματογραφικής στήλης.
define and compare the 2 phases
- Στατική (=ακίνητη) φάση = Στερεή (στρώμα στερεού) ή υγρή (στρώμα υγρού ακινητοποιημένο σε ένα στερεό υπόστρωμα)
- Κινητή φάση = Υγρή ή αέρια, που κινείται μέσω και κατά μήκος της στατικής φάσης
how are the 2 phases chosen
Οι δύο φάσεις επιλέγονται έτσι ώστε τα συστατικά του δείγματος (που επιθυμούν να διαχωριστούν) να κατανέμονται μεταξύ κινητής και στατικής φάσης σε διαφορετικό βαθμό
Explain what causes the final separation in chromatography
Ο χρωματογραφικός διαχωρισμός είναι αποτέλεσμα επαναλαμβανόμενων ισορροπιών των συστατικών μεταξύ των 2 φάσεων και της διαφορετικής μετακίνησής τους στη στατική φάση
Steps:
- Διαφορετική φυσικοχημική συγγένεια ουσιών ως προς στατική/κινητή φάση
- Κάθε συστατικό κινείται με διαφορετική ταχύτητα στη στατική φάση
- Εξέρχεται από τη στήλη σε διαφορετικούς χρόνους (χρωματογραφία στήλης) ή διανύει διαφορετική απόσταση στον ίδιο χρόνο στη στατική φάση (επίπεδη χρωματογραφία).
What are the different ways we can categorize chromatography techniques
Based on:
- Τον μηχανισμό διαχωρισμού
- η φυσική κατάσταση της στατικής και κινητής φάσης
- τη διάταξη της στατικής φάσης
- τη σχετική πολικότητα των δύο φάσεων
What are the subcategories for chromatography based on Το μηχανισμό διαχωρισμού
- Προσρόφηση
- Κατανομή
- Αποκλεισμός μεγέθους
- Ιοντοανταλλαγή Συγγένεια
What are the subcategories for chromatography based on the physical state of both phases
- Αέριο χρωματογραφία (GC)
- Υγρή χρωματογραφία
- Χρωματογραφία υπερκρίσιμων ρευστών (SFC)
What are the subcategories for chromatography based on διάταξη της στατικής φάση
- Χρωματογραφία στήλης
- Επίπεδη χρωματογραφία (Planar Chromatography)
For which types of chromatography can we categorize and separate using Τη σχετική πολικότητα των δύο φάσεων
Έχει νόημα στην υγρή χρωματογραφία
Compare normal vs reverse phase chromatography
- Πολικότητα στατικής φάσης > πολικότητα κινητής φάσης
—> Κανονικής φάσης - Πολικότητα κινητής φάσης > πολικότητα στατικής φάσης
—>Αντίστροφου φάσης
Briefly define each chromatography based on its mechanism of separation
- Adsorption chromatography
= Ο διαχωρισμός στηρίζεται στη διαφορετική συγγένεια των συστατικών του δείγματος με ένα πολικό προσροφητικό υλικό
—> eg SiO2
- Partition chromatography
= Ο διαχωρισμός στηρίζεται στη διαφορετική κατανομή των συστατικών του δείγματος μεταξύ κινητής και στατικής φάσης
—> Η ακίνητη φάση είναι συνήθως χημικά συνδεδεμένη με το υπόστρωμα, ώστε να αποφεύγεται η απομάκρυνσή της
- Size exclusion chromatography
= Τα μικρά μόρια εισχωρούν στους πόρους και καθυστερούν να εξέλθουν από τη στήλη, περιπλανώμενα στους πόρους του πληρωτικού υλικού. Τα μεγάλα μόρια εκλύονται άμεσα
—> this is bc the large ones will pass through without getting engulfed inside the pores, so will reach the bottom faster
—> Αυτό ισχύει μόνο για τη υγρή χρωματογραφία
- Ion exchange chromatography
= Ο διαχωρισμός στηρίζεται στη διαφορετική ιοντοεναλλακτική ικανότητα των συστατικών του μίγματος με τη στατική φάση
- Affinity chromatography
= Ο διαχωρισμός στηρίζεται στην απόλυτα εκλεκτική αλληλεπίδραση της στατικής φάσης με τον υπό προσδιορισμό ουσία (π.χ. αντισώματα, συνένζυμα, μέταλλα)
—> Συνήθως χρησιμοποιούνται υποκαταστάτες συνδεδεμένοι στην επιφάνεια του φορέα με ικανότητα να αναγνωρίζουν και να δεσμεύουν με εκλεκτικό και αντιστρέψιμο τρόπο συγκεκριμένα μόρια δεσμευτές (ligand).
what needs to be done to be able to do the παρακολούθηση της εξόδου των συστατικών του μίγματος από τη στήλη
Θα πρέπει η έξοδος της στήλης να συνδεθεί με ανιχνευτή (ευαίσθητο στα συστατικά του μίγματος και όχι στην κινητή φάση)
Define chromatogram / void time / elution curve / retention time
- Χρωματογράφημα (Chromatogram) = Συνάρτηση της απόκρισης του ανιχνευτή σε συνάρτηση με το χρόνο κατακράτησης
- Καμπύλη έκλουσης (Elution curve) = Καμπύλη συγκέντρωσης της ουσίας
- Χρόνος ανάσχεσης ή έκλουσης (Elution/retention time) = χρόνος από τη στιγμή έγχυσης του δείγματος στη στήλη μέχρι την εμφάνιση κορυφής
- Νεκρός χρόνος (Void/Dead time) = χρόνος που απαιτεί μια μη κατακρατούμενη ουσία μέχρι να φτάσει στον ανιχνευτή.
