Huellas Peptidicas Y Motivos Estructurales Flashcards
(14 cards)
Huellas peptidicas y motivos estructurales
- Da información acerca de las variaciones del genoma
- Descubrir los elementos funcionales de la secuencia (ENCODE)
- Se identificaron 22,000 genes podrían originar en una sola célula 500,000 proteínas diferentes (splicing alternativo)
- Las modificaciones post-traduccionales sirven para regular la actividad, con otras proteínas estabilidad y localización subcelular de una proteína, así como sus interacciones
- Las proteínas son efectoras del trabajo celular
Principal objetivo es entender la expresión, función y regulación del conjunto completo de proteínas codificadas por un organismo
Proteomica
Este estudio permitirá comprender los procesos biológicos y su variación en la enfermedad vs. Estado de salud, ya que se evalúan interacción entre proteínas, modificaciones post-traduccionales, funciones y localización
Proteomica
Ciencia que nos ayuda a realizar un análisis sistemático de las proteínas
proteomica
Para realizar el estudio de las proteínas se utilizan técnicas como:
- Electroforesis mono y bidimensional
- Espectrometría de masas
- Técnicas in silico (Análisis en bases de datos)
caracteristicas de proteomica
- La protómica requiere fraccionar mezclas de proteínas o péptidos para su análisis
- Separación
- Las estrategias para la separación buscan reducir la complejidad y el tiempo de análisis
- Interacciones proteína-proteína: purificación por afinidad-MS
- La proteína de estudio se aisla por la afinidad que tiene con un anticuerpo y las proteínas que están pegadas a ellas se analizan por espectrometría de masas (MS)
Proteomica pasos
homogenerilzación
Dezalinización y concentracion
Intercambio ionico y cromtografia de filtración en gel
SDS-PAGE
Degradación proteolitica
Purificación y secuenciación de peptidos
La purificación de una proteína supone una secuencia de etapas en las que las proteínas contaminantes se eliminan a partir de las diferencias de tamaño, carga e hidrofobicidad. La purificación se monitoriza mediante SDS-PAGE
Estrategia para la purificación de proteínas.
Desarrollaron la técnica de separación de proteínas utilizando geles de poliacilamida dos dimensiones
Electroforesis bidimensional
Caracteristicas de electroforesis bidimensional
- Isolectroenfoque (IEE) -> punto isoeléctrico (PI)
- Masa molecular
Separa por tamaño, carga y punto isoelectrico
- Masa molecular
Identificación de proteinas
- Una vez realizada la corrida del gel bidimensional
- Las manchas individuales se identifican mediante tinción, después se digieren con proteasas.
- Se secuencian mediante espectrometría de masas -> se identifica la proteína
Espectrometria de masas
- Muestras proteicas digeridas (tripsina)
- Péptidos más pequeños
- Una determinada combinación de los aminoácidos puede dar una determinada masa
- Se llama huella dactilar, debido a que hay péptidos que son especficos en algunas proteínas
- Cada aa tiene una masa específica
Espectrometria de masas como se analizan los datos?
analizados son comparados con las bases de datos genómicos y así poder inferir la proteínas
* Ensayo in silico
* Las características únicas nos permitirán identificar la proteína.
Huela peptidica (peptide mass fingerprint)
- Técnica mediante la cual es posible la identificación de proteínas
- Utiliza espectrometría de masas (MS)
- La MS utiliza la relación masa/carga para calcular los componentes que forman una proteína
