PCR

Question 1

tipos de PCR

Answer 1

PCR convencional
PCR cualitativa
PCR semicuantitativa
PCR cuantitativa
PCR multiple

Question 2

PCR convencional

Answer 2

• Amplificación de una región genética específica
• Se evalúa por medio de un gel de agarosa o acrilamida

Question 3

PCR cualitativa

Answer 3

• Identificar la presencia o ausencia de un fragmento específico
• Diagnóstico de enfermedades infecciosas

Question 4

PCR semicuantitativa

Answer 4

• Reconocer niveles de expresión de un gen (ARNm)
• Biopsias

Question 5

PCR cuantitativa

Answer 5

• Medir la cantidad o concentración de microorganismos o de ARNm de un gen en particular
• Se usa como referencia una curva con muestras con concentraciones conocidas

Question 6

PCR múltiple

Answer 6

• Amplificación de regiones genicas delimitadas por oligos en una misma reacción en PCR
• Cada region tiene sus pares de oligos

Question 7

fundamento de la PCR

Answer 7

Amplificación

Question 8

ejemplos de los que han usado PCR

Answer 8

IonTorrent
Solexa

Question 9

qué va a delimitar la longitud del fragmento a replicar?

Answer 9

• Técnica de replicación in vitro en una molécula de ADNg
• delimitado por primers u oligos

Question 10

principios basicos para la PCR

Answer 10

complementariedad
dirección 5’-3’
extremo 3’ debe estar libre

Question 11

etapas de la PCR

Answer 11

desnaturalización
replicación
elongación

Question 12

componentes para la PCR

Answer 12

• ADN
• Primers o cebadores
• DNA polimerasa
• DNTPs (desoxinucleotidos libres en forma trifosfatada)
• Magnesio (cofactor)

Question 13

Concentración necesaria para sintetizar 6.6-25 mg de ADN

Answer 13

50-200 mM

Question 14

Procedimiento de la PCR

Answer 14

I. Inicio de la desnaturalización (5 min, 95° C)
2. Ciclos de amplificación
— Desnaturalización (30 s, 95° C)
— Alineamiento (30-40 s, 50-60°
— Extensión (72° C)
3. Amplificación final (72° C)
4. Almacenamiento temporal 4°

Question 15

Quién inventó la PCR cuantitativa o en tiempo real?
Cómo cambió?

Answer 15

• Higuchi et al (1992) modifica la técnica para el análisis simultáneo de varias secuencias
• En tiempo real se va observando el crecimiento de una secuencia
• Mismo proceso de amplificación (desnaturalización, alineamiento, extension)

Question 16

Métodos de detección mediante fluorescencia

Answer 16

SYBER green
TaqMan

Question 17

SYBER green

Answer 17

agente intercalante que se coloca entre las dos cadenas de DNA
permite hacer transcriptomica y cuantificación de la expresión

Question 18

TaqMan

Answer 18

más especifico
detecta determinados SNPs en regiones especificas y los degrada
fluorescencia por degradación de la polimerasa

Question 19

cuáles son los 2 fluoróforos o reporteros que tendrá la sonda?

Answer 19

VIC y FAM
muy cerca esta el apagador
(absorbe la fluorescencia del reportero)
permite hacer genotipificacion e identificar la fluorescencia conforme avanza la reacción

Question 20

Ventajas de la PCR tiempo real (vs PCR punto final)

Answer 20

• Calcular la eficiencia de la reacción
• No necesita geles de agarosa
• Mayor rapidez y eficiencia

Question 21

aplicaciones de la PCR cuantitativa

Answer 21

• Análisis de expresión — cancer
• Investigación — detección de polimorfismos asociados a enfermedades, estudios de
  asociación caso-control
• Dx— COVID-19