interacciones proteína proteína

Question 1

Clasificación de las interacciones de proteínas

Answer 1

• en dominios en una misma cadena polipeptidica
• entre dominios de diferentes cadenas polipeptidicas
• en complejos formados entre proteínas dependientes

Question 2

Métodos para identificar las interacciones de proteínas

Answer 2

Y2H
FRET
* Rayo X
* ELISA (Ensayo enzimatico de Imunoabsorcion)
* Microarreglo de proteínas
* Microscopio electrónica
* Inmunofluorescencia

Question 3

pasos para Y2H (Yeast 2 Hybrid Screening: técnica de doble híbrido en levadura)

Answer 3

1) Separación del TF de un “gen reportero” en 2 partes: dominio de unión a DNA y dominio de activación
2) Unión de las 2 proteínas a los dominios
3) Si las proteínas tienen interacción, van a juntarse, uniendo de nuevo ambos dominios del TF y se va a transcribir el gen reportero

Question 4

FRET características

Answer 4

• Método microscópico que permite monitorear la interacción de proteínas en tiempo real (medir el tiempo de interacción)
• Las proteínas se marcan con fluoroforos aceptores (amarillo, YFP) y donadores (azul, CFP)

Question 5

cómo se verá FRET si las proteínas interactúan?

Answer 5

• Si las proteínas interactúan, CFP se excita a 436 nm y YFP la absorbe para excitarse y emitir
  a 480 nm una luz amarilla

Question 6

cómo se verá FRET si las proteínas no interactúan?

Answer 6

• Si las proteínas no interactúan, CFP se excita a 436 nm y emite a 480 nm una luz azul