Laboratoire de Biochimie FINAL

Question 1

eq de beer lambert

Answer 1

A = εlc

Question 2

pI =

Answer 2

valeur de pH ou la charge de l’AA est neutre

Question 3

utilité du pI à l’électrophorèse

Answer 3

si le pH > pI, le milieu sera basique donc, l’AA ne va pas re-capter son H+ carboxylique donc, il va être chargé (-) et il va migrer vers le borne positif.

si le pH < pI, le milieu sera acide donc, l’AA va capter un H+ supplémentaire sur l’amine donc, il va être chargé (+) et il va migrer vers le borne négatif.

Question 4

voltage et durée électrophorèse

Answer 4

voltage++ = migration plus vite;
temps de migration++ = migration plus loin;

Question 5

Acétate de cellulose:

Answer 5

-used to do électrophorèse.
-capable d’absorber le tampon
-capable de conduire la charge
-sépare à la fois les molécules selon leurs charge et leurs tailles

Question 6

faiblesses du dialyse(2)

Answer 6

-Elle ne permet pas de se débarrasser complètement des molécules non-voulues
et
-Des interactions avec les molécules trop grosses pour sortir peuvent retenir les petites molécules.

Question 7

Dialyse : Test de Biuret

Answer 7

Détecte la présence de protéines

Le cuivre en solution, normalement bleu, devient violet lorsqu’il interagit avec des acides aminés

Question 8

Dialyse: Test de Benedict

Answer 8

Détecte la présence de sucres réducteurs

La couleur du précipité dépend de la concentration de sucres réducteurs présents

Question 9

Extraction d’ARN au phénol-chloroforme: Que-fait le Phénol?

Answer 9

Lyser les cellules, libérer les acides nucléiques des protéines

Question 10

Extraction d’ARN au phénol-chloroforme: Que-fait le Chloroforme

Answer 10

Solvant organique beaucoup plus dense que l’eau, il permet une belle séparation en phases lors de la centrifugation (le phénol est organique mais a une densité similaire à l’eau)

Question 11

Extraction d’ARN au phénol-chloroforme: Que-fait l’Isopropanol?

Answer 11

Diminuer la polarité de la phase aqueuse pour faire culoter l’ARN

Question 12

Extraction d’ARN au phénol-chloroforme: Que-fait l’Éthanol?

Answer 12

ARN n’est pas soluble dans l’éthanol, mais plusieurs contaminants le sont.

Question 13

pourquoi lors d’une spectro, tu dois prendre l’absorbance de λmax = 260nm avec un grain de sel?

Answer 13

Car, c’est les NUCLÉOTIDES qui absorbent à 260nm, donc l’ARN et l’ADN. donc, plus d’ADN = plus haut absorbance à 260nm. Ceci peut te faire croire que l’ARN n’est pas plus pur, mais plus contaminé avec l’ADN.

Question 14

quoisse qu’on observe à λmax = 280nm?

Answer 14

phénol et protéines

Question 15

quoisse qu’on observe à λmax = 230nm?

Answer 15

les saccarides et l’EDTA

Question 16

pourquoi est-ce qu’on prend la ratio 260/280 et 260/230

Answer 16

si 260/280 > 2 l’ARN est considéré non-contaminé par les protéines et les phénols

et

si 230/280 > 2 l’ARN est considéré non-contaminé par les saccarides et l’EDTA.

(si les deux sont >2, l’ARN est considéré pur._

Question 17

role du RT

Answer 17

ARNm en ADNc

Question 18

particularités de l’étape RT

Answer 18

Ne nécessite pas d’amorces: La rétrotranscriptase peut s’attacher à l’ARN sans aide (origine virale)

N’est pas un cycle: Une seule séquence hybridation -> transcription -> fonte est nécessaire

Question 19

PCR rôle

Answer 19

Amplifier l’ADNg / l’ADNc

Question 20

RT steps

Answer 20

hybridation (sans amorce)
transcription (d’ADNc)
séparation des brins(fonte)

x1 (Pas un cycle!!!)

Question 21

combien de cycles dans une PCR

Answer 21

35-40

Question 22

steps d’un cycle PCR

Answer 22

séparation des brins(fonte) ~95C

amorçage ~60C

transcription ~70C

Question 23

quelles facteurs affectent la T d’hybridation et pourquoi il est important?

Answer 23

(plus long, plus spécifique ET plus de G et C = plus stable. Ces deux aspects vont faire que notre T d’hybridation augmente la spécifité. Si notre température d’hybridation est trop basse, il y aura une moins spécifité de l’amplicon et donc peut etre lors de l’électrophorèse on aura la présence de plusieurs bandes)

Question 24

%agarose role

Answer 24

haut pourcentage, traffic jam

bas pourcentage, highway

Question 25

electrophorèse après le PCR rôle

Answer 25

vérifier la pureté. On pense qu’on a transcrit une sséquence de 210nt, l’électrophorèse montre une seule bande à 210nt (selon l’échelle de poids moléculaires). Notre target est acheived. L’ADN est pur.

Question 26

CCM role

Answer 26

séparer des composantes d’un composé et les comparer

Question 27

Test de Molisch:

Answer 27

Pas de coloration - pas de glucides
Coloration rouge violette - glucides présents

Question 28

Test de l’iode

Answer 28

Coloration rouge - glycogène
Coloration bleue - amidon
Pas de coloration - possibilité de mono ou disaccharides

Question 29

Test de Barfoed:

Answer 29

Pas ou peu de précipité - sucrose
Précipité rouge-orange abondant en 5 à 8 min.= monosaccharides

Question 30

Test de Bial:

Answer 30

Pas de réaction – brun opaque - hexose
Coloration bleu foncé (mauve) - pentoses

Question 31

Test de Seliwanoff:

Answer 31

Pas de réaction - aldose
Coloration rouge - cétose

Question 32

phase mobile vs phase stationnaire

Answer 32

Phase mobile : solvant polaire qu’on peut alterer pour favoriser une séparation plus efficace.

Phase stationnaire: Gel de silice usually. les substances vont migrer sur celui-ci

Question 33

Rf equation

Answer 33

distance migré par le substance / distance migré par le solvant(phase mobile)