MALDI-TOF

Question 1

Vad står MALDI-TOF MS för?

Answer 1

Matrix assisted laser Desorption/Ionization -time of flight mass spectrometry

Question 2

Vad finns det för arbetsområde för rutindiagnostik för MADLI-TOF?

Answer 2

Artbestämning av framodlade mikroorganismer (genus/art)

• bakterier
• jästsvamp
• mögelsvamp

Question 3

Vad är MADLI TOF för form av metod?

Answer 3

Tillhör masspektrometri

Question 4

Hur fungerar arbetets gången vid MADLI TOF?

Answer 4

startar med databas-> ett labdata system-> ett patient prov tas-> fram odling av patient provet-> Provet tillsätts en metallplatta med håll-> Plattan sätts in i maskinen-> Resultat fås fram.

Question 5

Hur fungerar MALDI TOF ?

- jonisering

Answer 5

JONISERING

1. provet appliceras på brickan och täcks med matrixlösning
2. skjuter med laser på provet enligt ett förutbestämt mönster
3. molekyler från prover joniseras genom protonöverföring från matrix

Question 6

Hur fungerar ACCELERATIONEN i MALDI TOF?

Answer 6

ACCELERATION

4. extraktionsplattorna skapar ett elektrisk t fält för att accelerera de joniserade partiklarna.
5. en jonlins fokuserar jonerna. Deflektorplattor styr jonerna mot den linjära detektorn i toppen av “the flight tube”

Question 7

Hur fungerar JONISERING i MALDI TOF?

Answer 7

6. Jon-gaten gör att joner med låg massa, ex. från matrixen kan avvika från jonflödet.
7. I vakuum är “time of flight” för jonerna endast beroende av dess massa.
8. Joner som inte avviker genom jon-gaten träffar detektorn och genererar masstoppar

Question 8

Vad detekterar MADLI TOF?

Answer 8

Mest proteiner men även kolhydrater och lipider

Question 9

Vilka proteiner detekteras ?

Answer 9

proteiner som kan extraheras, är lösliga, relativt hydrofila, stabila och som förekommer i stora mängder.

Question 10

vad bestämmer signalintensiteten?

Answer 10

• mängd
• stabilitet
• vilka aminosyror

Question 11

Vad är ribosomen för något ?

• lilla enheten
• stora enheten

Answer 11

En proteinfabrik som översätter mRNA till aa. Finns i alla levande celler.
- I bakterier finns:
lilla enheten, 16S rRNA och 21 proteiner
stora enheten, 5S rRNA, 23S rRNA och 31 proteiner.

Question 12

Varför skall man utföra MADLI TOF MS för artidentifiering?

Answer 12

• sparar pengar
• snabbare!
• oftast säkrare än tidigare metoder
• “enkelt” men ändå ett hantverk

Question 13

Vilka program av IVD MALDI TOF finns det på marknaden ?

Answer 13

1. Bruker Daltonics

2. BioMérieux

Question 14

Hur fungerar IVD-systemet Bruker Daltonics ?

Answer 14

MALDI Biotyper databas har …

• enskilda stammar
• ca 2500 arter
• lista med stammar, med score + gränser
• det är möjligt att lägga in och jämföra egna spektra

Question 15

Hur fungerar IVD-systemet bioMérieux?

Answer 15

• arter
• ca 1100 bakteriearter + 219 svamparter
• svar: Art-id /tveksamt / ingen id
• program med möjlighet att lägga in och jämföra egna spektra

Question 16

vad är svårigheter med MADLI TOF ?

Answer 16

• Närbesläktade arter (databas otillräcklig? Eller omöjligt?)
• Nya arter
• Bakterier med kapsel, Mögel, vissa Gram-pos -> mer svårpeppade
• skillnader pga odlingsmnedium/ursprung
• framodlade bakterier krävs idag för optimalanalys

Question 17

Vad finns det för mer arbetsområden för MALDI TOF?

Answer 17

• arbetsbestämning direkt från urin/blododling

- antibiotikaresistens bestämning

Question 18

Viktigt att veta begränsningar, vilka begränsningar finns det?

Answer 18

• databaser är begränsade
• kommersiella databaser
• odlingsbaserade!