tema 16

Question 1

ingeniería enzimática

Answer 1

actividad en la que se modifica la secuencia aminoacídica de una enzima (estructura) con objeto de variar su función

Question 2

¿en qué se fundamenta la ingeniería enzimática?

Answer 2

en el axioma fundamental de la biología

Question 3

tipos de técnicas de evolución dirigida

Answer 3

(a) mutagénesis de sitio dirigido
(b) mutagénesis de saturación

Question 4

tipos de técnicas de evolución al azar

Answer 4

(a) mutagénesis de PCR propensa a errores
(b) mutagénesis por barajado genético

Question 5

tipos de técnicas de ingeniería genética

Answer 5

• técnicas de evolución dirigida
• técnicas de evolución al azar
• sinzimas

Question 6

define mutagénesis dirigida

Answer 6

técnica de ingeniería genética de evolución dirigida
usada para crear mutaciones puntuales en un sitio determinado de una hebra de ADN. se basa en la introducción de una mutación en un cebador, donde se extiende la cadena de ADN gracias a una polimerasa

Question 7

define mutagénesis por saturación

Answer 7

técnica de ingeniería genética de evolución dirigida que consiste en la sustitución de 1 aminoácido por los otros 19 posibles, en una posición concreta, mediante el uso de cebadores degenerados para crear todas las posiciones distintas

Question 8

define cebador degenerado

Answer 8

cebador con la misma secuencia de ADN molde menos en la posición donde queremos introducir la mutación, hay 4^3 posibilidades distintas

Question 9

define mutateca

Answer 9

conjunto de bacterias donde cada una porta un mutante distinto

Question 10

define mutagénesis por PCR propensa a errores

Answer 10

técnica de ingeniería genética de evolución al azar, que consiste en la amplificación del gen que codifica para una enzima en condiciones en las que la Taq polimerasa comete errores en la polimerización de una cadena de ADN

Question 11

define mutagénesis por barajado genético

Answer 11

técnica de ingeniería genética de evolución al azar, que se basa en la producción de mutantes mediante la recombinación in vitro de genes naturales, basada en el hecho de que los genes que codifican para las enzimas son muy parecidos entre sí y codifican proteínas muy similares
técnica creada por William Stemmer en 1994

Question 12

define sinzima

Answer 12

molécula conocida como enzima artificial que presenta capacidades catalíticas, son diseñadas de tal forma que son capaces de unirse al sustrato y llevarlo al estado de transición

Question 13

tipos de sinzimas

Answer 13

(a) sinzima derivadas de otras enzimas
(b) sinzimas derivadas de otras proteínas
(c) sinzimas derivadas de compuestos orgánicos
- ciclodextrinas
- mSOD

Question 14

ejemplo de mutagénesis dirigida

Answer 14

aumento de la termoestabilidad de la xilitol deshidrogenasa para la producción de bioetanol

Question 15

ejemplo de mutagénesis por saturación

Answer 15

para modificar la especificidad de sustrato de una enzima 2,4-DNT-dioxigenasa

Question 16

condiciones bajo las cuales la Taq polimerasa se equivoca

Answer 16

• introduciendo iones Mn2+, el cual baja la tasa de actividad
• modificando las condiciones estándares de la PCR:
  bajar/subir [Mg2+]
  bajar/subir [dNPTs] determinado para aumentar/disminuir su posibilidad

Question 17

ejemplo de mutagénesis por PCR propensa a errores

Answer 17

aumentar la actividad de la xilanasa a pHs básicos
la xilanasa actúa para el blanqueamiento del papel

Question 18

ejemplo de mutagénesis por barajado génico

Answer 18

aumentar la actividad lignina peroxidasa y su resistencia al H2O2
la lignina peroxidasa se encarga de degradar a la lignina y es sensible a la presencia de H2O2

Question 19

ejemplo de sinzima derivada de otras enzimas

Answer 19

papaína que es una cisteín proteasa a la que se le unió un residuo de flavina en la cys 25 dandole una nueva función: flavopapaína con actividad reductasa
los objetivos eran abolir la actividad proteasa y dotarla de una actividad oxidoreductasa de un análogo del NADH

Question 20

ejemplo de sinzima derivada de proteínas

Answer 20

la mioglobina se le unió un ión complejo a la His de su superficie y le dio actividad oxidasa

Question 21

sinzimas derivadas de compuestos orgánicos: ciclodextrinas

Answer 21

oligosacárido cíclico derivado de la degradación enzimática del almidón por parte de enzimas bacterianas
si la funcionalizamos con una molécula piridoxal adquiere una actividad aminotransferasa
esta enzima simplemente transporta una molécula, el piridoxal, que se encarga de la catálisis
es incluso esteroespecífica de L-aminoácidos

Question 22

sinzimas derivadas de compuestos orgánicos: mSOD

Answer 22

SOD: enzima que se encarga de la eliminación de iones superóxido
SOD bovina como medicamento de osteoartritis
compuesto M40403 es capaz de ligar Mn, dotando a la molecula de un sitio que simula el centro activo de SOD
tiene la capacidad de descomponer el anion superoxido, y tiene la ventaja de que al ser más pequeña que la SOD puede llegar a más sitios intracelulares, teniendo una kcat similar y no siendo inmunogénica