Metodos de estudio en Anatopato Flashcards
(20 cards)
Funciones de servicio de anatomia patológica
Estudia las enfermedades desde la morfologia hasta la biología molecular.
-Biopsias intraoperatorias
-Biopsias diferidas
-Citologías ginecológicas (papanicolau) y miscelaneas
-Autopsias no medicolegales (10% legales)
-Reuniones anatomoclinicas
-Comites oncologicos
-Interconsulta y auditorias
Metodos de estudio
-Citología
-Macroscopía
-Histologia basica
-Histoquimica
-Inmunohistoquimica
-Inmunofluorescencia
-Microscopia electronica
-Citometria de flujo
-Patologia molecular
-Telepatología
Citología
Se analiza tamaño, forma, relacion nucleo/citoplasma, acromacia, para conocer si son celulas normales, reactivas o neoplasicas.
Tipo de muestras:
-Exfoliativas –> cuello uterino
-Aspirativas o punción –> mama y tiroides
-Fluidos liquidos o lavados de cavidades –> pleura y cavidad abdominal
*Requieren procesamiento adicional, con centrifugación que permite el decantamiento y concentración de células
-Raspado, impronta o aposicion de tejidos –> tumores
–>Cuando se toma la muestra se realiza fijación precoz (inmediata) para conservar celulas y no se degeneren
Fijadores
-Spray citofijador
-Alcohol de 70-96 grados (para liquidos se emplea al 50% en igual volumen que la muestra)
-Mezcla de alcohol-citrato
Etapas de una biopsia diferida (paso 1 al 3)
1.-Obtención de muestra
–>Puede ser parcial (punción o biopsias endoscopica por pinza o incisional) que permite diagnostico inicial (ej resección de cancer gastrico con zona subcardial) o total con organos completos (tratamientos con intencion curativa)
2.-Envase y rotulación
–>Se debe envasar en frasco de plastico, transparente, tapa rosca y boca ancha, para que la muestra ingrese y salga con facilidad del frasco e impida la evaporación de formalina.
–>Debe haber buena rotulación con nombre completo, edad, sexo, rut, organo o porción representado, mas diagnostico clinico o sospecha
3.-Fijación
–>Se detiene el proceso de autodigestion citoplasmatica y nuclear, permitiendo que celula mantenga forma
–>No es conveniente congelar la muestra para estudio diferido (se producen artefactos)
–>Formalina es el fijador universal, debe ser 5 a 10 veces el volumen de muestra
–>La solucion comercial es al 37-40% que al diluir queda en 4%
–>Idealmente usar formalina tamponada o al menos neutralizada
Etapas de una biopsia diferida (paso 4 al 8)
4.-Macroscopia
–>Se identifica orden clinica y se realiza descripcion macroscopica, con seleccion de porciones representativas, incluidos linfonodos
–>Se realiza en campana con extración, dado que formalina es elemento toxico, por lo que debe ser manipulada en medios con presión negativa o mascarilas con filtros
5.-Procesamiento
–>Muestra pasa por diversos alcoholes para deshidratación y es impregnada en parafina y xilol
6.-Inclusión (realizar molde de parafina que contiene el tejido)
7.-Corte y tinción
8.-Analitica
–>Se analiza al microscopio, haciendo tinciones complementarias e informe anatomopatológico
Reporte de prostatectomia debe incluir
-Tipo histologico (si es o no cancer)
-Grado de gleason (diferenciación tumoral)
-Localización y tamaño
-Margenes quirurgicos (comprometidos o no, con extensión y gleason)
-Extensión extraprostatica (focal o establecida)
-Estado de vesiculas seminales
-Estado de linfonodos
Archivos generados (paso 9)
Se genera base de datos, informes en papel y se guardan laminas histologicas e inclusiones en parafina por minimo 15 años
Biopsia intraoperatoria
Procedimiento de 10-15 minutos donde se extrae una porción de tejido, se analiza y con ello se define una conducta quirurgica
–>Como no se puede procesar se congela y se hace corte en tejido congelado (se puede utilizar tecnica HE o con azul de toluidina)
Indicaciones y contraindicaciones de biopsias intraoperatorias
Indicaciones:
1.-Determinar presencia y/o caracter biologico de lesión para decidir tipo de cirugía
2.-Establecer si tejido obtenido contiene material para hacer un diagnostico o si se requiere de una muestre adicional
3.-Determinar el estado de los bordes quirurgicos y distancia a la lesion
Contraindicaciones:
1.-Muestra es tan pequeña que es imposible procesar suficiente tejido para cortes permanentes
2.-Tejido es grasa o esta calcificado (incluso osificado)
3.-La muestra viene en formalina
–>Es un recurso caro y escaso, y existen de error diagnostico
Autopsias
Ha disminuido la frecuencia en ultimos años por menor necesidad por imagenes, menor interes en que se descubran cosas no diagnosticadas
–>Util en casos de muertes con evidencia morfológica y poco util en caso de fallas funcionales
Tecnicas histoquimicas
Complementan a HE(nucleos azules/basofilos y citoplasma rosado/eosinofilo). Existen diversas tecnicas donde la mas utilizada es PAS, que tiñe de color magenta-morado claro glicogeno y mucopolisacaridos neutros, tambien mb basales y mayoria de hongos y parasitos
–>Se usa para analizis de biopsias de tejido muscular, para hacer estudio miopatico, donde se ve la distribución de enzimas, o en neoplasias hematologicas
Otras tecnicas histoquimicas
Rojo congo –> Amiloide
Gram –> Bacterias
Ziehl Neelsen –> Bacilos acido alcohol resistente
Pearls –> Fierro
Fontana masson –> Granulos neurosecreción
Reticulina –> Reticulo
Von kossa –> Calcio
Giemsa –> Hematología y bacterias
Oil red O –> Grasa
Luxol fast blue –> Mielina
Inmunohistoquimica
Altamente sensible y especifica, aplicable a material procesado en forma rutinaria, se correlaciones con parametros morfologicos, compatible con mayoria de fijadores y aplicable en citología
–>Util, rapida, costo razonable pero se requiere tejido muy bien conservado sin exceso de fijación
–>Se utiliza para definir origen de tumores que aparecen en sitios metastasicos (ej ganglio con adenocarcinoma). Ademas, permite diferenciación neuroendocrina, determinar estirpe de lesión, definición de areas sospechosas
*PSA: antigeno prostatico (tumor de origen prostatico)
RE: receptores de estrogenos (positivos en nucleo), corresponde a carcinoma ductal de mama
P504s: de origen prostatico
CD20: linfoma de estirpe B
Extra de inmunohistoquimica
*Marcadores de proliferación Ki-67 –> Marca que celulas estan en ciclo celular activo, lo que se asocia con grados de diferenciación, en que a mayor grado estan menos diferenciadas, presentan mayor permeación vascular
–>Ej >20% cel + a ki-67 es indicador de mejor respuesta a quimioterapia
*Oncogen c-erB2 se encuentra en 30% de carcinomas ductales infiltrantes de la maa lo cual es factor negativo en pronostico, al asociarse con tumor de mayor grado histologico, con presencia de metastasis al diagnostico
Tinción - completa o tinción leve y regular de mb –> -
Tinción completa de mb intensidad media –> equivoca (requiere confirmación por FISH)
Tinción completa e intensa de mb –> +
Indicaciones de inmunohistoquimica
1.-Tipicación de estirpe celular
2.-Diagnostico diferencial de neoplasias
3.-Tipificación de neoplasias hematologicas
4.-Factores pronosticos (como cancer mamaroio para receptores hormonales y HER2)
Tecnicas de hibridización
Hibridación in situ: complementación de pares de bases entre dos hebras sencillas mediante sondas reveladas con cromogeno
FISH: con sonda fluorescente
CISH: con cromogeno
Microscopia electrónica de transmisión
Se restringe a estudio de nefropatias y enfermedades hereditarias del musculo
–>Permite ver la mb basal del riñón, deposito de complejos inmune
*La microscopia electronica de barrido no tiene un uso actual en la anatomia patologíca
Microscopia con inmunofluorescencia
Estudio de depositos que se marcan con anticuerpos, los cuales presentan fluorocromo
–>Se usa en patología renal glomerular o alteraciones inflamatorias cutaneas (ampollas o penfigos)
Patología molecualr
RNA microarray: permite descubrimiento de grupos tumorales con identifación de mutaciones especificas (para mejorar dg o predecir el comportamiento)
Ej: cancer pulmonar EGFR se asocia a terapian con bloqueadores EGFR (mejor que QMT)
Otro es el melanoma con mutación BRAF
–>Existe software de analisis de imagenes pero no tiene uso claro
