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biomol > IVa cultivo celular > Flashcards

IVa cultivo celular Flashcards

1
Q

conjunto de técnicas que permiten el mantenimiento de las células in vitro, manteniendo al máximo sus propiedades fisiológvicas, bioquímicas y genéticas

A

cultivo celular

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2
Q

a que se refiere in vitro

A

a una técnica para realizar un determinado experimento en un ambiente controlado fuera de un organismo vivo

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3
Q

cultivo bacteriológico

A

-microrganismos
-bacterias, hongos y parásitos

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4
Q

cultivo celular

A
  • celulas eucariotas (ej. organismos pluricelulares)
  • protozoarios (paramecios, plasmodium, amebas)
    -levaduras (hongos microscopicos unicelulares)

en medicina se referiría a celulas representantes de un tipo celular específico (humano o especie de interés)

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5
Q

fase de latencia

A

tiempo que tarda en comenzar el crecimiento de un microorganismo tras ser inoculado en medio fresco

depende de la historia del inoculo, la naturaleza del medio y las condiciones de crecimiento

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6
Q

fase latencia
si un cultivo en fase exponencial se transfiere a un medio fresco bajo las mismas condiciones de crecimiento:

A

no hay esencialemente fase de latencia y prosigue en fase exponencial

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7
Q

fase latencia
si el inóculo proviene de un cultivo viejo:

A

las células están depletas de constituyentes esenciales para el crecimiento, se llevara tiempo sintetizarlos

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8
Q

fase latencia
si el medio cambia y se disponen de otros sustratos como fuentes de carbono por ejemplo, :

A

se requiere sintetizar las enzimas que permitirán aprovecharlo, eso lleva tiempo

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9
Q

estado más saludable de las células

A

fase exponencial

ideal para el estudio de enzimas u otros componentes celulares

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10
Q

fase exponencial

A

el numero de celulas se duplica en intervalos constantes de tiempo

en un cultivo por lote (tubo cerrado), los organismos no crecen indefinidamente de forma exponencial

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11
Q

un cultivo solamente permanece en fase exponencial por un tiempo limitado

A

menos de 10 generaciones

1 bacteria pesa 1 x 10-15 kg

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12
Q

fase estacionaria

A

comienza por agotamiento de nutrientes o acumulación de desechos

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13
Q

crecimiento críptico en la fase estacionaria

A

no hay incremento neto en el numero de células. algunas crecen mientras otras mueren

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14
Q

fase de muerte

A

tambien es exponencial, pero típicamente más lenta que la exponencial de crecimiento

las células pueden permanecer viables durante meses o incluso años

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15
Q

monitoreo del rendimiento de cultivos por espectrofotometría

A

celulas dispersan luz
la turbidez de una suspension celular aumenta en medida en q hay más celulas presentes
se mide la luz que atraviesa la suspensión sis ser dispersada

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16
Q

dos organismos pueden tener densidades ópticas dif a tiempos similares de medición por diferencias en tamaños, formas o velocidades de crecimiento:

A

el mismo valos de densidad óptica NO necesariamente correponte al mismo numero de celulas

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17
Q

espectro
cuando la turbidez es excesiva:

A

se pierde la correspondencia entre el numero de celulas y la densidad optica pq la luz dispersada de la fotocelda por una celula puede ser nuevamente enviada a la fotocelda por otra celula

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18
Q

ha sido considerada como mezcla de ciencia y arte

A

cultivo celular

19
Q

gracias a que se ha desarrollado el cultivo celular?

A

-medios de cultivo (mucho más complejos que para cultivo bacteriológico)
-disponibilidad de antibióticos
-instalaciones aséptica (salas, cabinas de flujo laminar, incubadoras)
-dispositivos de cultivo (frascos T, caja petri)

20
Q

medios de cultivo

A

tamponados para mantener un ph alrededor de 7.4
-indicadores de ph (rojo fenol), cambian de color a medida que aparecen catabolitos ácidos resultando del metabolismo celular
-antibioticos (ej penicilina, estreptomicina) y antimióticos (anfotericina) para impedir contaminación

21
Q

mezcla poco definida de macromoléculas adicionadas bajo la forma de suero fetal bovino o equino, o extracto crudo de embriones de pollo

A

medio de cultivo con suero

22
Q

quimicamente definidos con moleculas necesarias para la supervivencia y proliferación como los factores de crecimiento

A

medios de cultivo libres de suero

23
Q

condiciones de cultivo celular

A

incubación a 37°C en una atmosfera de 5% CO2, 95% aire

24
Q

frasco T

A

recipiente típico de 175 cm2 que puede contener aprox 1x10^7 células adheridas, y unas 1x10^8 celulas cuando se trata de lineas que crecen en suspensión

25
Q

cultivos primarios

A

-se preparan DIRECTAMENTE DEL TEJIDO U ORGANO
-con o sin fraccionamiento previo para separar los distintos tipos celulares
-celulas conservan sus caracteristicas originales y su PROLIFERACION ES LIMITADA
-pueden ser removidas del recipiente de cultivo para formar cultivos secundarios

25
Q

cultivo primario
monocapa

A

-mayoría de células que forman los tejidos no pueden vivir en suspensión, y requieren una superficie sólida sobre la cual crecer y multiplicarse (ANCLAJE - DEPENDIENTES)
-excepto celulas hematopoyeticas maduras
-este soporte es la base de una placa o frasco de plástico

26
Q

el área de anclaje disponible se haya toda cubierta de células

A

confluencia

27
Q

/cultivo primario monocapa
a veces los requerimientos son más complejos y el plástico debe recubrirse con:

A

COMPONENTES DE LA MATRIZ EXTRACELULAR que rodea a las células en los tejidos, como por ejemplo colageno y laminina

28
Q

cultivos secundarios

A

las celulas en monocapa confluente detienen su crecimiento hasta que se las subcultiva (resiembra) a un recipiente con medio fresco

las celulas frecuentemente mostrarán distintas propiedades según su origen

29
Q

lineas celulares
transformacion

A

inmortales, crecimiento aberrante (sin inhibición por contacto, ni anclaje-dependientes), malignas (diseminan e invaden), geneticamente inestables

-ej. se puede inmortalizar un fibroblasto si se les provee el gen q codifica para telomerasa
no todas las células humans se transforman asi
-otra forma es introducir ciertos oncogenes obtenidos de virus (ej HPV)

30
Q

las celulas de los roedores experimentan cambios genéticos espontaneos que:

A

las inmortalizan cuando son cultivadas

31
Q

HeLa

A

Henrietta Lacks
1952
primera línea celular humana. Adenocarcinoma

32
Q

ventajas del cultivo celular

A

condiciones controladas, representan tipos celulares especificos, acreditación de su pureza, reproducibilidad experimental, consumo reducido de reactivos, utiles en las primeras etapas de la investigación (modelo más sencillo) que evita el uso de animales, pueden ser conservadas y almacenadas en nitrógeno líquido (a -196°C) por un largo tiempo reteniendo su viabilidad

33
Q

desventajas del cultivo celular

A

se requiere experiencia para evitar contaminación y/o mala identificación, espacio de trabajo y equipos especializados, manejo de desechos plasticos y biológicos peligrosos, inestabilidad genetica (heterogeneidad), perdida de diferenciación

34
Q

premio nobel de medicina 1984

A

cesar milsten

35
Q

hibridomas

A

producción de anticuerpos monoclonales
-fusión de linfocitos B secretores de inmunoglobulinas (anticuerpos) y células derivadas de una línea tumoral de linfocitos B

36
Q

fusógeno

A

ej POLIETILENGLICOL

***permite las membranas estén muy cerca y se fusionen

37
Q

heterocarionte

A

célula con núcleos geneticamente diferentes separados pero con los contenidos citoplasmáticos compartidos

38
Q

medio selectivo HAT
HAT

A

hipoxantina, aminopterina y timidina

39
Q

aminopterina

A

es un antagonista competitivo del ácido dihidrofólico, vitamina necesaria para la sintesis de nucleotidos

-las celulas deben utilizar vías alternas para la síntesis de dna
estas vias alternas son defectivas en la linea celular tumoral pero estan intacta en la células del bazo. SOLO CÉLULAS HÍBRIDAS SOBREVIVEN

40
Q

HGPRT

A

hipoxantina guanina fosforibosil transferasa

41
Q

TQ

A

timidinoquinasa

42
Q

un heterocarionte puede entrar en mitosis, produciendo:

A

una célula híbrida en la cual las envolturas de ambos núcleos se han disgregado, permitiendo juntar los cromosomas de ambos en un único gran núcleo

43
Q

anticuerpo monoclonal

A

reconoce un único antígeno epitope antigénico

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