BfE-P5-WBT4-L04: Restriktionsendonucleasen Flashcards
(18 cards)
Was sind Restriktionsendonucleasen?
Proteine, die DNA an spezifischen Sequenzen erkennen und schneiden können
Welche zwei Arten von Enden können Restriktionsenzyme erzeugen?
Klebrige Enden (mit einzelsträngigen DNA-Überhängen) oder blunt ends (ohne Überhänge)
Woher stammen Restriktionsenzyme ursprünglich?
Aus Bakterien, wo sie als Abwehr gegen Viren dienen
Wie funktioniert die bakterielle Virenabwehr mit Restriktionsenzymen?
Die Enzyme zerschneiden die eindringende Virus-DNA
Welche Anwendung haben Restriktionsenzyme bei der Klonierung?
Sie ermöglichen das Einfügen von DNA-Fragmenten in Vektoren
Was ist RFLP-Analyse?
Restriktionsfragment-Längenpolymorphismus-Analyse zur Genotypisierung
Wofür werden Restriktionsenzyme in der Forensik verwendet?
Für die Erstellung von DNA-Fingerabdrücken
Welche Rolle spielen Restriktionsenzyme bei der Insulin-Herstellung?
Sie sind zentral für die Herstellung rekombinanter Produkte wie Insulin
Nach welchen Kriterien wird ein Restriktionsenzym ausgewählt?
Nach der spezifischen Sequenz in der Ziel-DNA und dem gewünschten Ergebnis des Verdauungsprozesses
Welche Komponenten enthält eine Reaktionsmischung für DNA-Verdau?
Zu verdauende DNA, Restriktionsenzym, geeigneter Puffer und bei Bedarf MgCl2 als Kofaktor
Warum ist MgCl2 manchmal nötig bei der DNA-Verdauung?
Als Kofaktor für die Enzymaktivität
Bei welcher Temperatur werden Restriktionsenzyme typischerweise inkubiert?
Häufig bei 37°C, kann aber je nach Enzym variieren
Wie lange dauert ein vollständiger DNA-Verdau normalerweise?
Oft reichen ein bis zwei Stunden aus
Wie wird der Erfolg eines DNA-Verdaus überprüft?
Durch Agarosegel-Elektrophorese
Wie funktioniert die Überprüfung per Agarosegel-Elektrophorese?
Die verdaute DNA wird auf ein Agarosegel aufgetragen und unter elektrischem Feld aufgetrennt
Woran können DNA-Fragmente nach der Elektrophorese unterschieden werden?
Anhand ihrer Größe
Welche Weiterverarbeitungsmöglichkeiten gibt es nach dem DNA-Verdau?
Klonen der DNA-Fragmente in Vektoren oder Analyse zur Genotypisierung/Überprüfung von Klonkonstrukten
Was sind kritische Parameter bei der DNA-Verdauung?
Die Konzentrationen von DNA und Enzym sowie die Inkubationszeit
