BfE-P5-WBT4-L08: Gensequenzierung nach Sanger Flashcards
(17 cards)
Was ist die Sanger-Sequenzierung?
Eine Methode zur Sequenzierung der DNA, mit der die exakte Abfolge von Nukleotiden in einem DNA-Molekül bestimmt werden kann
Wofür wird die Sanger-Sequenzierung verwendet?
Zum Beispiel zur Überprüfung von Klonen
Was sind ddNTPs?
Kettenabbrechende Didesoxynukleotidtriphosphate, die gezielt in DNA-Stränge eingebracht werden
Wie unterscheiden sich ddNTPs von normalen dNTPs?
Durch eine fehlende Hydroxylgruppe (-OH) an der 3’-Position des Zuckermoleküls
Warum führen ddNTPs zum Kettenabbruch?
Die fehlende Hydroxylgruppe verhindert, dass weitere Nukleotide angehängt werden können, wodurch die DNA-Synthese abbricht
Was wird in einer Sanger-Sequenzierungsreaktion angesetzt?
Vier unterschiedlich fluoreszierend markierte ddNTPs, vier dNTPs, DNA-Polymerase und ein einzelsträngiges DNA-Template
Was dient als Vorlage bei der Sequenzierung?
Das zu sequenzierende einzelsträngige DNA-Molekül
Welche Funktion hat der Primer?
Er bindet an den Anfang der zu lesenden DNA-Sequenz
Welche vier dNTPs sind in der Reaktion enthalten?
Adenin, Guanin, Cytosin und Thymin
Was passiert wenn ein ddNTP eingebaut wird?
Die Elongation der Kette wird unterbrochen, was zu DNA-Fragmenten unterschiedlicher Länge führt
Womit enden alle resultierenden DNA-Fragmente?
Mit einem ddNTP
Wie werden die DNA-Fragmente aufgetrennt?
Durch Kapillar- oder Polyacrylamidgel-Elektrophorese nach Größe
Wie werden die Fragmente nach der Elektrophorese detektiert?
Per Laser, da jedes der vier ddNTPs mit einem eigenen fluoreszierenden Farbstoff markiert ist
Was gibt die Größe der Fragmente wieder?
Die Sequenz der Vorlage
Wie entspricht die Position des ddNTPs der ursprünglichen Sequenz?
Die Position des ddNTPs entspricht dem komplementären Nukleotid in der Vorlage
Wie wird die ursprüngliche DNA-Sequenz ermittelt?
Aus der Reihenfolge der Fragmente, die jeweils das Ende der Sequenz an der Stelle eines bestimmten ddNTPs markieren
Welche Eigenschaft ermöglicht die automatische Erkennung der Fragmente?
Jedes ddNTP ist mit einem eigenen fluoreszierenden Farbstoff markiert
