Cours 14 Flashcards
(82 cards)
1
Q
C’est quoi l’ADN est il sert à quoi?
A
L’ADN est le matériel héréditaire des organismes vivants. Il sert à transmettre l’information génétique de génération en génération.
2
Q
L’ADN encode quoi?
A
Il encode toutes l’information génétique permettant de produire les ARN codant des protéines (ARN messager) et non-codant (ARN non traduit en protéine
3
Q
Comment s’appelle Le processus permettant de produire tous les ARN d’un organisme vivant?
A
La transcription
4
Q
Les protéines sont produites à partir de quoi?
A
des ARN messagers (ARNm) par un processus que l’on appelle la traduction
5
Q
V ou F: le génome de certains virus est constitué d’ARN; par exemple: les rétrovirus et le virus de la grippe
A
Vrai
6
Q
Comment se fait la transcription et traduction chez les procaryotes vs les eucaryotes?
A
Chez les procaryotes, la transcription et la traduction sont réalisées dans le cytoplasme en même temps (non-compartimentalisé).
Chez les eucaryotes, la transcription et la traduction sont compartimentalisées. La transcription est effectuée dans le noyau alors que la traduction est effectuée dans le cytoplasme (compartimentalisé).
7
Q
C’est quoi Le pré-ARNm?
A
Le pré-ARNm est également modifié par une série d’enzyme dans le noyau des cellules eucaryotes pour donner l’ARNm mature.
8
Q
L’ARNm est transféré dans le cytoplasme via les pores nucléaires. Dans le cytoplasme, qu’arrive-t-il à l’ARNm?
A
l’ARNm est traduit par les ribosomes
9
Q
Les ARNr et ARNt sont également exportés dans le cytoplasme où ils contribuent à quoi?
A
au processus de traduction.
10
Q
Qu’est-ce qu’un gène?
A
une séquence d’ADN qui est transcrit en un ARN non-codant ou un ARNm codant une protéine
11
Q
Si cet ARN est par la suite traduit en protéine, on dit que c’est un…
A
un ARN codant ou ARN messager (ARNm)
ARNm: traduit en protéine
ARN non codant : ARN ribosomal (ARNr), ARN de transfert (ARNt), etc.
12
Q
L’ARN codant ou ARN messager sert d’intermédiaire dans quoi?
A
la régulation de l’expression génique en permettant de transmettre l’information encodée dans le matériel héréditaire (génome) généralement constitué d’ADN pour produire des protéines
13
Q
Les ARN non-codants ont quelle fonction?
A
enzymatique ou autre qui est autonome.
14
Q
Les ARN ribosomaux (ARNr) et ARN de transfert (ARNt) jouent un rôle dans quoi?
A
la régulation de la traduction.
15
Q
De nombreux autres ARN non-codants sont également impliqués dans la régulation de l’expression génique:
A
transcription, régulation post-transcriptionnelle (épissage, contrôle de la demi-vie des ARNm) et traduction.
16
Q
V ou F: Les régions 5’ et 3’ non traduites chez les ARNm qui codent pour des protéines font partie du gène
A
Vrai
17
Q
Comment ce fait la Régulation de l’expression génique?
A
La régulation de l’expression génique est un élément essentiel du fonctionnement et de l’adaptation des organismes à leur environnement (réponse à l’activation des voies de transduction de signal sur le court ou le long terme).
L’expression d’un gène est régulée principalement au niveau transcriptionnel (c’est le cours d’aujourd’hui).
18
Q
La traduction constitue un second niveau de régulation dans le cas des gènes qui produisent quoi?
A
un ARNm et donc qui code pour une protéine
19
Q
C’est quoi la transcription?
A
transmission de l’information génique de l’ADN à l’ARN, donc production d’ARN à partir de l’ADN.
20
Q
Quel sont les 3 point concernant ‘‘La transcription d’un gène dépend de séquences régulatrices’’
A
- Le promoteur est une séquence non-transcrite à l’extrémité 5’ du gène qui régule l’initiation de la transcription.
- Il y a parfois présence d’une séquence non-traduite à l’extrémité 3’ du gène qui régule la terminaison de la transcription (un terminateur chez les procaryotes et la séquence de polyadénylation chez les eucaryotes).
- L’ARN polymérase est l’enzyme qui permet la synthèse de l’ARN à partir du brin d’ADN matrice. L’ARN polymérase produit de l’ARN dans les sens 5’-3’.
21
Q
Quelle est la différence entre l’ARN et l’ADN polymérase?
A
Bien que l’ARN polymérase et l’ADN polymérase procèdent toutes deux dans le sens, 5’-3’, contrairement à cette dernière, l’ARN polymérase ne requiert pas d’amorce
22
Q
Voir slide 7
A
23
Q
V ou F: L’ARN polymérase comporte plusieurs sous-unités
A
Vrai
Voir slide 8
24
Q
Quels sont les sous-unités de l’ARN pol et quelles sont leurs caractéristiques?
A
Alpha:
- Masse moléculaire: 36.5
- Nombre par enzyme: 2
- Fonction: Initiation de la transcription, interaction avec les protéines régulatrices qui se lie au promoteur
Bêta:
- Masse moléculaire: 151
- Nombre par enzyme: 1
- Fonction: Initiation et élongation de la chaîne
Bêta’:
- Masse moléculaire: 155
- Nombre par enzyme: 1
- Fonction: Liaison de l’ADN
Sigma:
- Masse moléculaire: 70
- Nombre par enzyme: 1
- Fonction: Reconnaissance du promoteur (initiation seulement)
Omega:
- Masse moléculaire: 11
- Nombre par enzyme: 1
- Fonction: Promeut l’assemblage de l’enzyme
25
V ou F: Le facteur sigma nécessaire à l’initiation de la transcription peut varier d’un promoteur à l’autre.
Vrai
26
Voir slide 9 et 10 (Structure de l’ARN polymérase)
27
Quelles sont d'Autres différences avec la réplication?
Il n’y a pas d’amorce: le facteur sigma ou un autre activateur de la transcription favorise l’initiation de la transcription.
L’ARN polymérase a la capacité intrinsèque de désenrouler l’ADN (briser les ponts H entre les deux brins): elle a une activité hélicase intrinsèque.
À partir d’un promoteur, un seul brin est transcrit en continu
L’édition (correction) se fait par clivage au même site actif que la polymérisation
28
Quelle est la Relation entre ADN et ARN lors de la transcription?
Remarquez que l’orientation du brin matrice et de l’ARN produit par la transcription suivent les mêmes principes que pour la réplication de l’ADN: le brin matrice orienté en 3’-5’ produit un ARN complémentaire du 5’ vers le 3’.
29
Il est intéressant de noter que de par la complémentarité des brins d’ADN, le brin non-matrice est aussi appelé ______
brin codant,
car, outre la présence de T à la place de U, sa séquence correspond à celle de l’ARNm, et permet donc de prédire la séquence de la protéine qu’il encode.
30
Voir slide 13
31
Comment se fait l'Initiation de la transcription?
la taille des espaceurs entre la boîte -35 et la boîte -10 et cette dernière et l’initiation de la transcription est déterminée en grande partie par les propriétés structurales de l’ARN polymérase et la position des régions interagissant avec ces divers éléments. Le nombre de nucléotides entre les deux boîtes est donc conservé (voir la diapo précédente).
32
Comment se fait l’initiation de la transcription chez les procaryotes?
Durant l’initiation de la transcription chez les procaryotes, le facteur sigma qui est une sous-unité de l’holoenzyme de l’ARN polymérase joue un rôle absolument essentiel en reconnaissant les boîtes -10 et -35. La sous-unité sigma permet de recruter les sous-unités catalytiques de l’ARN polymérase spécifiquement au promoteur et sur le brin matrice. Elle diminue effectivement d’environ 10,000 fois l’affinité de l’ARN polymérase pour des sites alternatifs.
Les deux brins de l’hélice sont dissociés directement par l’ARN polymérase en aval de la boîte -10. Ensuite, la détection du +1 de transcription par l’ARN polymérase enclenche le début de la phase d’élongation.
Une fois que l’ARN polymérase commence l’élongation, le facteur sigma se détache des autres sous-unités qui poursuivent la synthèse de l’ARN. L’ARN polymérase ne contenant pas de facteur sigma est donc appelé le “cœur” catalytique de l’ARN polymérase.
33
Il y a 7 facteurs sigma chez E. coli qui permettent de faire quoi?
recruter l’ARN polymérase à un sous-groupe ou un autre de gènes. Le principal facteur sigma est appelé sigma70 à cause de sa masse moléculaire. L’expression de certains facteurs sigma est régulée par les conditions environnementales.
34
Chez les eucaryotes, il n’y a pas de protéine homologue au facteur sigma. La fonction du facteur sigma chez les eucaryotes et donc plutôt accomplie par quoi?
facteurs de transcription
35
Comment se fait la Régulation de la transcription chez les procaryotes: selon le modèle d'opéron et répresseurs?
1. Le gène régulateur encode un répresseur protéique qui peut lier l’opérateur (O) et par conséquent inhibe la transcription des gènes structuraux SG1-3.
2. Une petite molécule appelée inducteur forme un complexe avec le répresseur, ce qui altère l’équilibre entre deux états conformationels du répresseur.
3. Le complexe inducteur-répresseur a beaucoup moins d’affinité pour l’opérateur
4. L’enlèvement du répresseur permet la transcription des gènes structuraux, soit la production d’ARNm (une copie d’ARN des gènes structuraux).
5. La séquence d’ARNm est traduite en protéine
36
Chez les procaryotes, il existe principalement quels deux types de molécules qui modulent l’initiation de la transcription et que font-ils?
Les activateurs de la transcription qui sont essentiels à l’initiation de la transcription par l’ARN polymérase II sur certains promoteurs.
Les répresseurs de transcription qui bloquent l’avancée de l’ARN polymérase II à partir de son promoteur.
37
C'est quoi un opéron?
Un opéron est un groupe de gènes adjacents qui sont co-transcrits formant ainsi un ARN polycistroniques.
38
Les ARNm chez les procaryotes sont souvent ________
polycistroniques: ils contiennent la séquence codante de plusieurs protéines ou ARN (donc techniquement ils contiennent plusieurs gènes).
39
Ils peuvent également être _________
monocistroniques (ce qui est la norme chez les eucaryotes) auquel cas, ils contiennent la séquence codante d’un seul gène
40
Quels sont les 2 actions du répresseur?
Transcription bloquée.
La liaison du répresseur à l’opérateur inhibe la transcription des gènes structuraux (souvent par effet stérique)
Transcription activée.
L’inducteur se lie au répresseur diminuant ainsi l’affinité du répresseur pour l’opérateur. La dissociation du complexe répresseur (inactif)-inducteur de l’opérateur permet la transcription des gènes structuraux.
41
Le ________ est toujours utilisé de manière préférentielle (en premier) par les procaryotes.
Glucose
Lorsque la concentration de glucose disponible dans le milieu devient trop faible, la capacité de remplacer l’ATP consommé par les processus cellulaires est diminuée.
Cela fait augmenter la concentration de l’AMPc qui active la protéine réceptrice de l’AMPc (CRP) qui peut alors agir comme un activateur de la transcription en augmentant l’affinité de l’ARN polymérase pour le promoteur et ainsi permet l’initiation de la transcription
Malgré cela en absence d’inducteur, le répresseur bloque la transcription.
42
Quand observera-t-on une activation maximale du promoteur activé par CRP-AMPc?
Seulement en présence d’inducteur
43
On peut cartographier les sites de liaison d’une protéine liant l’ADN comme un facteur de transcription en se servant de quoi?
la capacité de ces dernières de protéger leur site de liaison de la dégradation non spécifique par une nucléase telle la DNaseI. Cette technique tire parti du même effet de protection que celui induit par les nucléosomes décrit dans le cours sur la transcription. (voir slide 18)
44
la phase d’élongation de la transcription est caractérisée par quoi?
le déplacement du complexe ouvert (“bulle”) formé lors de l’initiation le long de l’ADN.
45
Qu'est-ce qui arrive chez les procaryotes et eucaryotes lors de l'élongation?
Lors de l’élongation chez les procaryotes la partie catalytique de l’ARN polymérase se dissocie de la sous-unité sigma qui reste associée au promoteur.
L’équivalent chez les eucaryotes consiste en la dissociation de l’ARN polymérase des facteurs de transcription associés au promoteur.
46
Bien que l’ARN polymérase ne possède pas d’activité exonucléase en tant que tel (contrairement à l’ADN polymérase), on pense que quoi?
on pense qu’elle a la capacité d’effectuer des corrections en détectant les mauvais appariements
47
C'est quoi le Ralentissement de
l’élongation?
La transcription n’est pas effectuée à un rythme constant. Ainsi la “bulle” peut rester immobile pendant l’ajout de plusieurs ribonucléotides jusqu’au moment où la progression de l’ARN polymérase recommence.
Ce mécanisme de ralentissement de la transcription survient en particulier dans des régions difficiles à transcrire. Ce ralentissement permet également d’apporter des corrections à la chaîne d’ARN (en cas de mauvais appariement).
48
Comment se fait la Terminaison de la transcription?
1. Un segment riche en A (orange) du brin matrice a été transcrit en un segment riche en U dans l’ARNm.
2. La tige boucle formée par le duplexe d’ARN déplace cette partie du transcrit du brin matrice ou du site de liaison dans l’ARN polymérase
3. L’instabilité des liaisons A-U unissant le transcrit et le brin matrice favorise leur dissociation, l’arrêt de la transcription et la libération du transcrit.
49
50
les gènes dont la terminaison de la transcription est indépendante (de facteurs protéiques) sont caractérisés par quoi?
la présence d’une région riche en G-C capable de former une tige boucle très stable suivi d’une région riche en A (seulement deux liaisons hydrogène par pb) qui se dissocie donc plus facilement de l’ARN néotranscrit.
51
Quels sont les deux types de terminaison de transcription chez les procaryotes?
La première représentée sur cette diapo est indépendante de tout facteur protéique.
La seconde représentée sur la prochaine diapo dépend de la protéine rho
52
Comment se fait la Terminaison de la transcription avec rho?
1. Liaison de rho au complexe ADN-ARN-polymérase
2. La liaison de rho affaiblit l’interaction entre le matrice et le transcrit causant leur dissociation et celle de rho et de l’ARN pol.
53
C'est quoi Rho?
Rho est une protéine hexamérique possèdant une activité ATPasique et une capacité à lier l’ARN qui lui permet de dérouler l’ARN (activité hélicase) et ce faisant, défait l’hétéroduplexe l’ARN forme à son 3’ avec le brin d’ADN matrice.
54
La séquence de reconnaissance de Rho est riche en quoi?
cytosine, mais elle peut-être extrêmement variable d’un gène à l’autre
55
Quelles sont les Cinq grandes différences chez les eucaryotes?
1. Trois ARN polymérases au lieu d’une seule: elles se partagent les tâches (voir la diapo 7).
2. Les nucléosomes doivent être déplacés pour permettre la transcription.
3. Des facteurs de transcription généraux interviennent dans l’initiation de la transcription.*
4. La terminaison de la transcription repose sur la polyadénylation dans la plupart des cas.
5. Les pré-ARNm sont maturés: épissage etc.
56
Quels sont les types d'ARN polymérases des eucaryotes et quels sont leurs fonction?
ARN pol 1: Transcription des ARN ribosomaux (ARNr)
ARN pol 2: Transcription des ARNm
ARN pol 3: Transcription des ARN courts non codant tel l’ARNt l’ARNr 5S et d’autres ARN courts (ARNs)
57
Quels sont les promoteurs des eucaryotes?
La boîte TATA (également dénommé boîte Goldberg-Hogness) est l’équivalent de la boîte -10 chez les procaryotes et correspond à la séquence suivante:
T A T A A
T
82% 89% 52%. 59% 49%
89%
Elle est positionnée entre -20 et -30 du site d’initiation de la transcription.
58
En amont de cette séquence se trouve d’autres séquences régulatrices:
la boîte CAAT (GGCCAATCT): elle est reconnue par les facteurs de transcription appelés “Core binding Factors” (CBFalpha et CBF bêta)
la boîte GC (GGGCGG): elle est reconnue par les facteurs de transcription de la famille Sp (Sp1-4 etc.). Fonctions similaires aux amplificateurs (enhancer, voir diapo 33)
la boîte octamère (ATTTGCAT): elle est reconnue par les facteurs de transcription octamère (Oct1-11)
59
C'est quoi le complexe d’initiation de l’ARN polymérase chez les eucaryote?
Voir slide 26
Plusieurs protéines contribuent au recrutement de l’ARN polymérase sur les promoteurs eucaryotes. Certaines telle la protéine liant la boîte TATA (TATA binding protein or TBP) sont importantes pour tous les types d’ARN polymérase. On appelle ces protéines des facteurs de transcription généraux.
Lorsque la TBP lie la boîte TATA, l’hélice d’ADN se plie et se déroule en partie.
60
Plusieurs facteurs contribue à la répression de la transcription en maintenant la chromatine inactive comme:
certaines modifications post-traductionnelle des histones formant le nucléosome (H2A, H2B, H3 et H4), l’histone H1, HP1 et le complexe répressif polycomb qui recrute des histones désacétylases (HDAC) qui inhibent le désassemblage des nucléosomes
les nucléosomes pourraient empêcher les facteurs de transcription et l’ARN polymérase II d’accéder aux séquences qu’elles reconnaissent au sein d’un promoteur donné. Il existe donc des mécanismes moléculaires pour relâcher ou renforcer l’interaction entre l’ADN et les nucléosomes au sein des promoteurs eucaryotes.
En effet, l’acétylation des histones sur les lysines neutralise la charge positive de leur chaîne latérale, ce qui entraîne une diminution de l’affinité des histones pour l’ADN (voir les deux prochaines diapos). Cela favorise donc généralement l’initiation de la transcription.
Inversement la présence d’histone désacétylase du complexe répressif polycomb (HDAC) sur la chromatine inactive (hétérochromatine) augmente donc sa compaction. De la même manière, la méthylation de la lysine 9 de l’histone 3 recrute la protéine HP1 qui contribue également à la compaction de l’hétérochromatine. Cela défavorise donc généralement l’initiation de la transcription.
61
Comment s'appelle la chromatine inactive?
hétérochromatine
62
Comment s'appelle la chromatine active?
Euchromatine
63
Plusieurs facteurs contribue à l’activation de la transcription en activant ou en maintenant la chromatine active comme:
certaines modifications post-traductionnelle des histones formant le nucléosome (méthylation, acétylation) par des protéine méthylase ou histone acétyltransférase permettent la dissociation des nucléosomes et favorisent donc l’accès des facteurs de transcriptions centraux au promoteur.
La méthylation des histones H3 sur la lysine 4 (H3K4) est un signal d’activation de la transcription
64
Quels évènements sont essentiels à la régulation transcriptionnelle chez les
eucaryotes.
Des histones conservées dans le domaine amino-terminal basique sont actétylées par les histones acétylases (euchromatine) ou désacétylées par des histones désacétylases (hétérochromatine) réduisant ou augmentant ainsi l’affinité des histones pour l’ADN, respectivement
65
Comment se fait l'Enlèvement des nucléosomes sur l’euchromatine et pourquoi est-ce que c'est essentiel?
Les régions avec des histones acétylées et avec des méthylations
spécifiques de l’euchromatine (H3K4) permettent le recrutement de complexe (tel que SWI/SNF, INO80 etc.) qui permettent via une activité ATPasique l’enlèvement des nucléosomes dans certaines régions du promoteur. Cela est essentiel pour permettre le recrutement des facteurs de transcription centraux (TBP etc.; voir diapo 28 et 33). La structure ci-contre montre l’interaction de certaines composantes d’un complexe de la famille SWI/SNF avec le nucléosome
66
L’activation sur un promoteur dont l’activité est régulée par les voies de signalisation telles que celles contrôlées par les récepteurs nucléaires fait quoi?
fait intervenir une série de facteurs spécifiques dépendant de la liaison des récepteurs (modulant l’accès à la chromatine) qui régulent l’association des facteurs de transcription généraux avec le promoteur.
67
La maturation des pré-ARMm en ARNm comporte quelles trois étapes?
L’insertion de la coiffe 5’, soit l’ajout d’une m7-guanosine. L’insertion de la coiffe est effectuée durant la phase d’élongation de la transcription.
La polyadénylation soit l’addition d’une queue poly(A). La polyadénylation survient au moment de la terminaison de la transcription.
L’épissage, soit l’enlèvement des segments de séquence non-codante correspondant aux introns et la juxtaposition des exons. L’épissage est complété suite à la terminaison de la transcription.
Ces trois modifications surviennent dans la plupart des ARNm eucaryotes.
68
Comment fonctionne la Maturation de l’ARNm-1 (Eucaryote): coiffe 5’?
Une coiffe en 5’ est ajouté à de nombreux ARNm (mature). Elle est constituée d’une 7-méthylguanosine unit par un lien phosphodiester atypique 5’-5’ triphosphate.
Des méthyles sont ajoutés ou non sur le 2’ –OH des deux premières bases. Cette coiffe joue un rôle dans l’initiation de la traduction et dans la stabilisation de l’ARNm
La coiffe 5’ empêche la dégradation par des exonucléases 5’-3’ en rendant l’extrémité 5’, similaire à un 3’ (en effet le ribose du nucléotide guanosine de la coiffe à un 3’-hydroxyle libre au lieu d’un 5’ PO4- libre).
D’autres modifications peuvent survenir à la coiffe 5’, mais elles sont moins fréquentes.
Entre autres, une méthylation en N6 est fréquemment observée si la première base de l’ARNm est une adénine.
69
Comment se fait la La terminaison de la transcription chez les eucaryotes?
Chez les eucaryotes, l’ARN polymérase II poursuit la transcription au-delà de la séquence codante du gène. Dans la région 3’ du gène il y a une ou plusieurs séquences AAUAAA qui est reconnue par une endonucléase qui permet l’arrêt de la transcription en coupant en aval de sa séquence de reconnaissance. Cette séquence induit également l’ajout d’une queue poly (A).
La queue poly (A) détermine la demi-vie de l’ARNm de plusieurs gènes. Les ARNm défectueux (terminaison hâtive) n’ont pas de queue poly (A) ajouté et sont rapidement dégradés. La taille de la queue poly (A) d’un ARNm peut varier d’un type cellulaire à l’autre.
70
71
Le raccourcissement de la queue poly (A) est corrélée avec quoi?
la dégradation d’un ARNm. La queue poly (A) se raccourcit progressivement dans le cytoplasme et lorsqu’elle atteint un niveau critique, cela cible l’ARNm vers la dégradation (par des RNAse ou ribonucléase).
72
La longueur de la queue poly-A et sa dégradation progressive dans le cytoplasme a donc un impact sur quoi?
la quantité de molécule de protéines produites pour chaque molécule d’ARNm.
73
La queue poly-A permet entre autre le recrutement sur l’ARNm de quoi?
La queue poly-A permet entre autre le recrutement sur l’ARNm de la protéine liant la queue poly-A (PABP pour poly-A binding protein) qui reste associée à l’ARNm durant la traduction
74
Quelle est la différence entre la demi-vie moyenne d'une ARNm d'un procaryote vs un eucaryote?
A titre de comparaison, la demi-vie moyenne d’un ARNm procaryote est de quelques secondes à quelques minutes, alors que les ARNm eucaryotes ont une demi-vie de quelques heures à quelques jours. Cette différence est principalement due à la présence de la queue poly-A et des protéines interagissant avec cette région telle la PABP. La liaison de la PABP bloque l’activité des RNAses/ribonucléases qui pourraient dégrader l’ARNm
75
Les gènes eucaryotes codant des protéines (donc transcrit par l’ARN polymérase II) comportent la plupart du temps des région non-codantes appelées _____ et des régions codantes appelées _____
introns
exon
76
Suite à la terminaison de la transcription, on obtient un pré-ARNm. Pour obtenir l’ARNm (mature) contenant uniquement les exons l’un à la suite de l’autre, qu'est-ce qui doit arriver?
tous les introns doivent être enlevés par un phénomène qu’on appelle l’épissage.
77
C'est quoi un épissage alternatif?
Certains exons peuvent être également omis ou alternativement insérés produisant des séquences codantes alternatives. On dit alors que le gène en question peut subir un épissage alternatif.
78
C'est quoi le mécanisme de la réaction d’épissage?
La structure lasso formée par la formation d’un lien phosphodiester entre le 2’ hydroxyle d’une adénine du site d’embranchement et une guanosine dans le site d’épissage de l’exon (ici exon 1) est caractéristique de l’épissage.
Cela a comme conséquence de rapprocher la guanosine en 3’ de l’exon 1 de la cytosine en 5’ de l’exon 2 permettant l’attaque nucléophile du 3’-hydroxyle de la première sur le 5’-phosphate de la seconde pour ainsi créer l’ARNm épissé et l’intron boucle. La première espèce est alors exportée dans le cytoplasme alors que la deuxième est dégradée dans le noyau
(Slide 37)
79
Quel est Le défi du clonage des gènes chez les eucaryotes et quelle est la sollution?
Procaryote: gène -> séquence codante -> ARNm -> Protéine
Eucaryote: gène -> séquence codante (exons) + introns -> ARNm -> Protéine
chez les eucaryotes on ne peut donc obtenir la séquence codante à directement à partir du matériel génétique (ADN) en utilisant une seule PCR.
Solution: ARNm (séquence codante, sans les introns) -> transcription inverse -> ADNc du gène
L’ADNc peut alors être utilisé comme matrice dans une PCR afin de cloner la séquence codante du gène d’intérêt ou pour cloner toute la librairie d’ADNc représentative d’un type cellulaire ou d’un tissu complet.
80
La transcriptase inverse permet donc de faire quoi?
d’inverser le flux normal de l’information génétique en utilisant un brin matrice d’ARN pour produire un ADN complémentaire (ADNc).
81
C'est quoi la Technique de pointe: ARNseq?
La technique de RNAseq permet
d’identifier et de déterminer
l’abondance de transcrits d’ARN
(totaux ou restreint aux ARNm uniquement) sans a priori.
82
La technique dépend de quoi?
Elle dépend de notre capacité à:
1. isoler les ARN d’intérêt
2. la maîtrise de la manipulation des acides nucléiques, en particulier l’utilisation de la réverse transcriptase rétrovirale pour transformer l’ARN en ADN complémentaire (ADNc)
3. les méthodes de séquençage de nouvelle génération qui permettent de séquencer en parallèles des millions de séquences.
