PR03 - Virusstructuur, vermeerdering en pathogenese

Question 1

Waarom is virologische diagnostiek belangrijk?

Answer 1

• Bevestigen of uitsluiten van diagnose
• Opstellen van behandelplan
• Opstellen van preventieplan overige (huis)dieren
• Inschatten van prognose
• Inschatten van besmettingsrisico andere dieren en mensen

Question 2

Wat wil je aantonen om een virusinfectie te bevestigen?

Answer 2

• Een virus (heel virus, virus antigeen, of virus genoom)
• Virus-specifieke antilichamen (gepaarde sera of IgM)

Question 3

Hoe kun je een heel virus aantonen?

Answer 3

• Virusisolatie
• Electronenmicroscoop

Question 4

Hoe kun je een virus antigeen aantonen?

Answer 4

• Immunoperoxidase kleuring (IPOX)
• Sneltest (ELISA principe)

Question 5

Hoe kun je een virus genoom aantonen?

Answer 5

• PCR
• Hybridisatie met DNA/RNA probe

Question 6

Hoe werkt een immunoperoxidase test (IPOX)?

Answer 6

Immunoperoxidase is een manier van immunokleuring. Immunoperoxidasereacties zijn een subklasse van immuunhistochemische of immunocytochemische procedures waarmee de antilichamen zichtbaar worden gemaakt met een peroxidase-gekatalyseerde reactie.

Question 7

Hoe werkt een ELISA test?

Answer 7

ELISA is een immunochemische reactie en alle immunochemische bepalingen zijn gebaseerd op hetzelfde principe, de specifieke binding tussen antigeen en antistof. Door het aantonen daarvan in het bloed, serum of andere lichaamsvloeistof van een mens of een dier is het mogelijk bij te dragen aan de diagnose van een infectieziekte of een auto-immuunziekte.

Question 8

Wat is een cytopathologisch effect (CPE)?

Answer 8

Een virus kan al dan niet een cytopathologisch effect (CPE) veroorzaken. Dit houdt in dat de cellen, waarin het virus groeit, doodgaan of bepaalde afwijkingen laten zien. Dit is het principe van een virusisolatiemethode.

Question 9

Welke vormen van cytopathologische effecten zijn er?

Answer 9

Question 10

Hoe worden syncytia cellen gevormd?

Answer 10

Question 11

Hoe werkt antigeen detectie?

Answer 11

Question 12

Hoe werkt antilichaam detectie?

Answer 12

Question 13

Hoe werkt een FeLV/FIV combo SNAP test?

Answer 13

Question 14

Hoe kunnen er ‘gaten’ in de celcultuur ontstaan door de virussen?

Answer 14

• Verstoring van het cytoskelet
• Lyse of apoptose induceren
• Samensmelting tot reuscellen

Question 15

Waarom groeien virussen (in tegenstelling tot bijv. bacteriën) niet op een voedingsbodem?

Answer 15

Ze hebben een levende cel nodig, en die bevinden zich niet op een voedingsbodem

Question 16

Waaruit bestaat het medium waarin de cellen zijn gekweekt die gebruikt worden voor de virus isolatie?

Answer 16

Eiwitten, suikers, juiste zoutgehalte, groeifactoren en antibiotica

Question 17

Met welke andere methode(n) zou je direct virussen in het keelmonster met een hoge virustiter kunnen aantonen?

Answer 17

ELISA, electronenmicroscoop. PCR kan ook bij een lage virustiter

Question 18

Wat kun je gebruiken voor de identificatie van een geïsoleerd virus?

Answer 18

Antisera met bekende specificiteit

Question 19

Wat is de directe en indirecte methode om de binding van antilichamen aan antigeen zichtbaar te maken?

Answer 19

Direct: door aan het antilichaam een fluorescerende marker of enzym te koppelen
Indirect: door een tweede antilichaam gekoppeld met een fluorescerende marker of enzym gebruiken dat bindt aan het eerste antilichaam

Question 20

Waarvoor dient het incuberen met 10% geitenserum in PBS (zgn. blockbuffer)?

Answer 20

Voor diagnostische doeleinden

Question 21

Wat is een conjugaat?

Answer 21

• Als het bindt aan een antilichaam, dan is het een gelabeld antigeen
• Als het bindt aan een virus, dan is het een gelabeld antilichaam

Question 22

Wat is een SPF dier?

Answer 22

Een specific pathogen free dier, oftewel dit dier draagt geen (slechte) pathogenen bij zich

Question 23

Waarom is het belangrijk dat het gebruikte serum afkomstig is van een SPF kat?

Answer 23

Hij mag geen geschiedenis hebben met een van de te testen virussen, anders krijg je geen betrouwbaar resultaat

Question 24

Wat is plaque assay?

Answer 24

De plaque assay is een standaardtechniek in de virologie, waarmee men het aantal infectieuze virusdeeltjes in een virussuspensie kan bepalen.

Question 25

Wat is virus titer?

Answer 25

De concentratie van infectieuze virus deeltjes (dus niet de totale virus deeltjes)

Question 26

Wat is het nadeel van een te lage virus titer in een vaccin?

Answer 26

Dat het niet werkt

Question 27

Wat is het nadeel van een hoge virus titer in een vaccin?

Answer 27

Dat je er ziek van wordt, of dat er een allergische reactie wordt opgewekt

Question 28

Wat kun je waarnemen bij een plaque assay?

Answer 28

Bij een toenemende verdunning observeer je minder plaque forming units, en dus ook minder ‘gaatjes’ in je preparaat

Question 29

Bij inspectie van een plaque assay worden er in de 10^-6 verdunning 175 plaques gevonden en in de 10^-7 verdunning 10 plaques. Welke waarde is het meest betrouwbaar?

Answer 29

De waarde bij de kleinste verdunning, 10^-6, want hoe groter de verdunning hoe groter de foutmarge

Question 30

Hoe kun je plaques bepalen indien het virus geen cytopathologisch effect veroorzaakt (en dus geen gaten in de cellaag)?

Answer 30

M.b.v. gelabelde antilichamen, die kunnen binden aan het virus

Question 31

Wat gebeurt er tijdens de inoculatie bij een eindverdunningsreeks?

Answer 31

Het aanbrengen van het monster (virus) op de cellen. Je geeft dan het virus de kans te binden aan de receptor van de cel, en om de cel binnen te dringen.

Question 32

Wat gebeurt er tijdens de 3 dagen na de inoculatie?

Answer 32

Virusvermeerdering/replicatie

Question 33

Wat is het verschil tussen de plaque assay en de eindverdunningsmethode?

Answer 33

De eindverdunningsmethode is een statische benadering; je kijkt of het virus aanwezig is of niet. De plaque assay is nauwkeuriger want je kijkt naar het aantal virusdeeltjes

Question 34

Bereken de titer van het linker voorbeeld m.b.v. van het rechter voorbeeld

Answer 34

X₀ = 6
d = 1
n = 12
X_i = 12 + 11 + 3 = 26
ID₅₀ / volume = 6 - (1/2) + (1/12) * 26
= 7,66… / 100 microliter

10^7,66… is voor 100 microliter, dus:
10^8,66… is voor 1 milliliter