12.pred Flashcards
biolistička transformacija
što sadrži bakterija agrobacterium tumefaciens
sadrži osim kromosoma, genomske DNA i Ti-plazmid (tumor inducirajući plazmid)
horizontalni transfer gena
transdukcija, transformacija i konjugacija
veličina Ti plazmida
210 kb
šta sve ima Ti-platmid
LB i RB regije, T-DNA, vir gene, ori i gene za korištenje opina
problemi kod primjene Ti-plazmida kod biljke
plazmid je prevelik pa je težak za manipulaciju, teško je naći jedinstvena restrikcijska mjesta, teško je izolirati, pipetirati, također Ti-plazmid uzrokuje pojavu tumora kod biljke, a onda ne možemo regenerirati biljku iz tumorske stanice
rješenje: kloniranje na manjim plazmidima u e.coli, rekombinantni plazmidi ne uzrokuju pojavu tumora
šta sadrži razoružani plazmid
ori i za e.coli i za A. tumefaciens, između LB i RB (onaj gen koji želimo ubaciti u biljnu stanicu i gen za selekciju transformiranih biljnih stanica, promotore i terminatore), gen za selekciju bakterijskih stanica
konstruira se u e.coli i iz e.coli se prenosi konjugacijom u a.tumefaciens
pomoćni plazmid (helper vector) šta sadrži
ori za a.tumefaciens, vir gene, uklonjena T-DNA
metoda lisnih diskova ponovi
rajčica koji gen i za šta
PG-poligalakturonaza-odgovoran za razgradnju mesa rajčice, tj. truljenje
razoružani plazmid za rajčicu
ponovi
antisense tehnologija
rajčica Flavr Savr
interferencija RNA
razine genetičke manipulacije sisavaca
manipulacije stanica u kulturi
transgene životinje
kloniranje životinja
diferencirana stanica
sposobnost jedne stanice da se dijeli i proizvede sve diferencirane stanice u tijelu
sustavi za selekciju transfeciranih animalnih stanica
1.podloga HAT-geni tk i hprt
2.geneticin-gen aph
3.higromicin-B- hph
primjena CRISPR-Cas sustava
u preciznom editiranju, popravljanju eukariotskih genoma
koje su faze djelovanja CRISPR-Cas sustava
stjecanje imunosti i reakcija imune bakterije
