2.pred

Question 1

metilirane baze

Answer 1

N6-metiladenin, 5-metilcitozin, N4-metilcitozin

Question 2

restrikcijeske endonukleaze

Answer 2

cijepaju dsDNA unutar specifične sietrične sekvence, najčešće oalindromske sekvence duljine 4 ili 6 pb, rjeđe 8 pb

Question 3

izoshizomeri

Answer 3

različiti enzimi koji cijepaju istu sekvencu, ali na različit način

Question 4

striktni izoshizomer

Answer 4

različiti enzimi koji cijepaju istu sekvencu na isti način

Question 5

što uzrokuje religacija?

Answer 5

obnavljanje restrikcijskog mjesta

Question 6

rekombinacija in vitro

Answer 6

inače se to događa u živim stanicama tijekom mitoze i mejoze
ako uzmemo neki fragment DNA i pocijepamo sa restrikcijskim enzimima i nakon toga provedemo ligaciju pri čemu se ti fragmenti međusobno ispremještaju

Question 7

najčešće spontana oštećenja u DNA

Answer 7

hidroliza, oksidacija, alkilacija, dezaminacija baza

Question 8

inducirana oštećenja

Answer 8

zračenja, kemijska mutagena sredstva

Question 9

koliko različitih plazmida možemo dobiti ugradnjom jednog inserta u plazmid?

Answer 9

možemo dobiti dva različita plazmida jer se insert može ugraditi u vektor u dvije orijentacije

Question 10

sastav restrikcijske otopine

Answer 10

rest enzimi nabavljaju se zajedno s odgovarajućim puferom (10x koncentrirani), pH=7-9, Tris-HCl (10mM), dvovalentni kation: MgCl2 (10mM), monovalentni kation (NaCl ili KCl, 0-150 mM), reducens: 2-merkaptoetanol ili ditiotreitol

Question 11

aktivnost

Answer 11

jedna jedinica (unit) dovoljna je za potpuno cijepanje 1 mikrograma DNA bakteriofaga lambda pri optimalnim uvjetima u volumenu od 50 mikrolitara u periodu od jednog sata
aktivnost ovisi o udaljenosti od kraaja dsDNA

Question 12

sprječavanje neželjene restrikcije

Answer 12

1.inaktivaqcija restrikcijskog enzima
-20-30 minuta na 60-70 stupnjeva, samo za termolabilne
-dodatak EDTA (etilendiamintetraoctena kiselina)
2.sprječavanje kontakta DNA i enzima-fizičkorazdvajanje DNA i enzima
-ekstrakcija s fenol/kloroform/izoamilni alkohol
-taloženje DNA pomoću amonijeva acetata i etanola (talog DNA, supernatant su proteini)
-elektroforeza i izolacija DNA iz gela

Question 13

vjerojatnost pojave nekog određenog slijeda nukleotida

Answer 13

(1/4)na 4

Question 14

kako znamo koliko fragmenata DNA je nastalo restrikcijom i koliko su oni dugački?

Answer 14

elektroforeza omogućuje razdvajanje i vizualizaciju fragmenata DNA