14. Lipidek analitikája: zsírsavösszetétel, egyedi komponensek. Flashcards
(18 cards)
Lipidek minősítése
általános: nedvesség, víz, illóanyag, hamu, szennyeződés
fizikai: eredet, minőség, hamisítás miatt, csúszás- vagy dermedéspont
kémiai: szénlánchossz, telítetlenség, savszám, szappanszám
Minta előkészítés
- szárítás (nedvesség akadályozhatja az oldószerbejutást)
- szemcseméret csökkentés (homogenitás, extrakció miatt fontos)
- savas hidrolízis (HCl): kötött lipid felszabadítása –> pl.: fehérjéből, fehérje bontás
normáloldat
megadja, hogy 1 l-nyi oldatban mennyi egyenérték tömegnek megfelelő oldott anyag van.
Egyenérték tömeg = móltömeg/vegyérték
HCl-nál pl.: a vegyérték 1, mert 1 H+ iont tud leadni
Oldószer választás
olcsó,
alacsony forráspontú (hogy könnyen eltávolítható legyen),
ne legyen toxikus vagy gyúlékony
legelterjedtebb: petrol-éter, etil-éter, hexán
Analitikai módszerek
- Elválasztástechnika: VRK (angolul: TLC), GC, kapcsolt technikák: MS, NMR
- Kémiai: savszám, szappanszám, jódszám
Jódszám
100 g lipid hány g jódot tud felvenni
Wijs módszer: lipid extrakció –> ismert tömegbe ismert mennyiségű jód (Wijs-reagens) –> nátrium-tioszulfáttal visszatitrálás keményítő indikátor mellett
Szappanszám
észterkötések meghatározása:
- megmutatja, hogy 1 g lipid elszappanosításához hány mg KOH kell
- etanolos KOH-ban (adott mennyiségű) főzzük az ismert mennyiségű lipideket (észterekből K-szappanok lesznek) –> feleslegben maradt KOH-ot HCl-al titráljuk indikátor mellett [mg KOH/g lipid]
Savszám
szabad zsírsav tartalom:
1 g lipidhez hány mg KOH szükséges, hogy a szabad zsírsavakat semlegesítsük
extrahált, ismert tömegű lipideket etanolban oldunk, KOH-al titráljuk
triglicerid bomlás mérése
Elválasztástechnika: VRK (TLC)
Különböző lipidfrakciók koncentráció eloszlásának vizsgálatára, minőségi és mennyiségi vizsgálat is lehet
pl.: élelmiszerekben
- -> Állófázis: szilikagél
- -> Futtatószer: kloroform, éter és hexán elegye
- -> Előhívószer: jódgőz, kénsav, zsíroldható szinezék, foszformolibdénsav, ninhidrin
–> adszorpciós és megoszlásos elvű is lehet
VRK mérés metodika
- petroléter vagy éter túlfuttatásával lapok lipidmentesítése
- indulási vonal rajzolása grafittal (kb. 20 mm)
- Hamilton fecskendővel a mintát felvisszük a start vonal megjelölt pontjára –> 6-8 mm-nél ne legyenek nagyobbak a foltok
- meleg légárammal a foltok bepárlása (hajszárító) –> oldószert hagyjuk elpárologni
- Lemezt a futtatószer gőzeivel telített futtatókamrába helyezzük –> kapilláris erők hatására felszívódik a futtatószer
- oldószer frontját megjelöljük (közel a lap tetejéhez)
- foltok súlypontját bejelöljük
VRK kiértékelés
Rf: retenciós faktor
(denzitométerrel akár)
jó oldószer: Rf 0,3-0,7 között legyen
GC - mit határozhatunk meg?
Mit: zsírsavak, trigliceridek, szterinek, zsíroldható vitaminok
–> minőségi és mennyiségi meghatározás
Milyen formában: szabad és észter formában kötött zsírsavakat is –> azonos formába kell hozni őket
FAME –> metilészterek elválasztása: metanolízis–> metanolos KOH-katalizátor: metanolt zsírsavval való reakcióba lépésre ösztönzi, savként viselkedik, protonját a zsírsavnak adja át
kis lipidminta esetén: BF3-os KOH-os mikrometanolízis
GC metodika
rövid szénláncú zsírsavaknál (C<10) nem kell feltétlenül származékképzés
elválasztás: apoláris (szilikonolaj) vagy poláris (poliészter) megosztófázis
Telítettség szerint:
apolárison: telítettek (legnagyobb forráspontú) távozik utoljára, előbb a telítetlenek
polárison: pont fordítva –> telített majd telítetlen
Kromatogram
- elsőként osz. csúcs jelenik meg
- növekvő molekulatömeg és szénatomszám szerint
- retenciós idő alapján azonosítjuk a csúcsokat –> próbakeverékhez mérten
- ismeretlen komponenst Kováts-féle retenciós indexszel állapítjuk meg –> retenciós idő és szénatomszám logaritmusa közt fennálló összefüggés alapján
Egyéb lipidmeghatározási módszerek
- NIR: roncsolásmentes, gyors, jellemző abszorpciós sávok az IR spektrumban
- HPLC - nagy nyomású folyadékkromatográfia: zsírsav, szterin, zsíroldható vitamin, triglicerid, mennyiségi meghatározás, UV detektálás
- Telítetlen FAME frakcionálás szilárd fázisú extrakcióval
Telítetlen FAME frakcionálás szilárd fázisú extrakcióval
ezüst ionok + telítetlen zsírsavak –> poláris komplex
- -> telítettek elválasztása a telítetlenektől
- -> cisz-izomerrel erősebb komplex, mint transszal, sztérikusan jobban hozzáférhetőek
- -> több kettős kötés –> erősebb kh.
kolonna: savas jellegű, hogy az aktív C ne tudjon abszorbeálódni a felületre
GC kolonna különböző célcsoportokhoz
- rövid C lánc, szabad zs.sav –> savas jellegű kolonna (hogy ne abszorbeálódjanak a felületére)
- metil-észterek: forráspont elúció, apoláris GC kolonna
- metil-észter származék telítetlenség vizsgálat: kapilláris GC kolonna
- omega 3 és 6 FAME vizsgálat: nagyon hasonló forr.pont és lánchossz –> legpolárisabb GC kolonna
GC előtt származékképzés
Derivatizálás: mivel a legtöbb zsírsav nem illékony (kivéve vajsav) így átészterezéssel származékot képzünk
1. triglicerid + metanol + NaOH –> FAME + glicerol
zsírsav + metanol + kénsav vagy sósav –> FAME + H2O
- ezután szerves oldószerben oldjuk, majd extrakcióval, vízzel kioldjuk a vízoldható szennyeződéseket
- Szerves fázist GC-vel meghatározzuk
