18. Fehérjék komplex jellemzése: elektroforetikus technikák.

Question 1

miért fontos komplexen jellemezni a fehérjéket?

Answer 1

1. nem csak tápanyagforrás
2. allergiát, érzékenységet okozhat
3. eredetazonosításban segít

Question 2

gabonában fehérjék

Answer 2

morfológiailag –> biokémiai funkcionalitás –> oldhatóság szerint –> (kémiailag)

1. csírafehérje (magban) –> enzimfehérje –> albuminok (kémiailag: egyszerű fehérjék) és globulinok (kémiailag: összetett fehérjék)
2. aleuronfehérje (védőfehérjék a magban, csírázás elindulásáig) –> oxido-reduktázok, hidrolázok –> prolaminok (kémiailag: lipoproteinek) és glutelinek (kémiailag: glikoproteinek)
3. endospermfehérje (legnagyobb térfogatban, ekörül aleuron) –> védő-, regulátor-, tartalékfehérjék, membránfehérjék

Question 3

oldhatóság alapján elválasztás

Answer 3

vízben –> albuminok
sóoldatban –> globulinok (a só kinyitja a szerkezetet, a kötésekre hat)
szerves oldószer –> prolaminok
híg sav, lúg –> glutelinek

Question 4

Elektroforetikus módszerek

Answer 4

hajtóerő: elektromos erőtér, ellentétes töltésű elektród irányába indulnak a fehérjék –> géllel lassíthatjuk, méret szerint is elválaszthatunk

régen: papír elektroforézis
ma: natív és SDS gélelektroforézis

Question 5

elektroforézis egyenlet

Answer 5

v = Em = E * z/fnű

v: sebesség
m: molekula mozgékonysága a töltéssűrűségből adódóan
z: molekula töltése
f: molekula alakjából, átmérőjéből adódó érték
E: az elektromos erőtér nagysága

Question 6

natív és SDS gélelektroforézis

Answer 6

• -> agarózgél vagy poliakrilamid gél (PAG)
• -> elválaszthatóak: fehérjék, nukleinsavak

SDS (Na-dodecil-szulfát) –> hatása: kitekeri a molekulát, egységes töltés, negatív –> így méret szerint jól elválik

kisebb méretű fehérjék gyorsabbak

detektálás: jelző festék (interkaláló) vagy UV lámpa

pl.: halfehérje vizsgálat

Question 7

IEF - izoelektromos fókuszálás

Answer 7

2 D technika, megoldás arra, hogy egy sávban több biokémiai funkciójú fehérje is lehet
pH gradiens a gélen –> ahol a fehérje eléri az izoelektromos pontját, ott kicsapódik

Question 8

Westernblott

Answer 8

antitest-specifikzs fehérjemeghatározás

1. gélelektroforézis
2. fehérjetranszfer nitrocellulózra
3. blokkolás
4. első antitest adagolás, mosás
5. második antitest adagolás, azonosítás

Question 9

CE - Kapilláris elektroforézis

Answer 9

kicsi átmérő (50-100 mikrométer) és 0,5-1 cm hosszú kapillárisban, nagy feszültség hatására

–> a nagyobbak gyorsabbak

Question 10

Lab-on-a-chip

Answer 10

kapilláris elektroforézisből fejlődött

• • SDS tartalmú gél injektálása a kapilláris csatornákba –> a gél nyomás hatására egyenletesen eloszlik
• -> szeparációs csatornában elektrokinetikai erők hatására válnak szét

Detektálás: fluoreszcens detektorral

Question 11

Lab-on-a-chip alkalmazás

Answer 11

• -> DNS és RNS meghatározsá
• -> környezeti és szennyvizek szennyezésének nyomonkövetése
• -> orvosbiológiai kutatások

Question 12

kapcsolt technikák

Answer 12

MALDI-TOF-MS:
Matrix Assisted Laser Desorption Ionization
Time of Flight
Mass Spectrometry

Question 13

Gélszűrés, gélkromatográfia

Answer 13

gélágyon keresztül áramlik az oldószerben lévő minta –> nagyobb molekulák előbb eluálódnak, mert a kisebbek elvesznek a gélszemcsék között