Sequenziamento del DNA Flashcards
(2 cards)
Metodi principali di sequenziamento del DNA
- METODO MAXAM&GILBERT: SEQUENZIAMENTO CHIMICO
- METODO SANGER: SEQUENZIAMENTO che sfrutta dei NUCLEOTIDI MODIFICATI chiamati DIDEOSSINUCLEOTIDI
Maxam-Gilbert method
Per SEQUENZIARE il DNA c’è bisogno di ssDNA e MARCATO in quanto per la DETECTION bisogna RILEVARE delle BANDE relative ai FRAMMENTI di DNA che sono stati costruiti.
La MARCATURA è una MARCATURA TERMINALE.
I FILAMENTI hanno un’ESTREMITA’ 5’ e un’ESTREMITA’ 3’. Per realizzare una MARCATURA TERMINALE si RIMUOVE il FOSFATO in 5’ e questo FOSFATO viene SOSTITUITO con un FOSFATO RADIOATTIVO.
Normalmente si utilizza il FOSFORO 32 in maniera tale che il FILAMENTO risulta essere MARCATO.
Successivamente questo FILAMENTO MARCATO viene SUDDIVISO in 4 ALIQUOTE ognuna delle quali viene TRATTATA con uno SPECIFICO REAGENTE CHIMICO che MODIFICA SPECIFICAMENTE una BASE.
E’ un metodo che sfrutta dei REAGENTI CHIMICI per andare a TAGLIARE il DNA in corrispondenza di SPECIFICHE BASI.
La ragione per cui il DNA MARCATO viene SUDDIVISO in 4 ALIQUOTE è perché 4 sono le BASI presenti nel DNA quindi saranno utilizzati 4 DIVERSI REAGENTI CHIMICI ognuno dei quali ha la proprietà di determinare una ROTTURA del DNA in corrispondenza di una SPECIFICA BASE.
