Clonagem - Roteiro de Estudos Flashcards
Clonagem - Definição
Produção de indivíduos geneticamente iguais ao seu progenitor.
Clonagem Molecular - Origem do Termo
Genética bacteriana → considera uma colônia de bactérias como clones.
Na colônia → todos os “indivíduos” são geneticamente idênticos à bactéria inicial (progenitora).
Clonagem Molecular - Compreende resumidamente pelo menos 2 estágios importantes:
1 → ?
2 → ?
1 → O fragmento de DNA (alvo/interesse) chamado de inserto, retirado de um organismo doador, é ligado a uma outra molécula de DNA chamada de vetor para formar o que se chama de DNA recombinante.
2 → A molécula do DNA recombinante é introduzida numa célula hospedeira compatível, num processo chamado de transformação. A célula hospedeira (receptora) que adquiriu a molécula do DNA recombinante é agora chamada de transformante ou célula transformada que irá propagar o DNA (alvo/interesse)
Para se fazer uma clonagem molecular de um inserto são necessários: 3
Vetores de Clonagem
Células Hospedeiras (Receptoras)
Enzimas
Enzimas 3
Enzimas de Restrição
DNA polimerase
Ligases
Enzimas - Enzimas de Restrição → Função
“tesouras moleculares” → servem para cortar o DNA.
Enzimas - DNA polimerase → Função
Polimerizar ou multiplicar o inserto.
Enzimas - Ligases → Função
Promovem a ligação dos DNAs cortados pela ER
Vetor de Clonagem - Um Bom Vetor 4
Moléculas Pequenas
Capacidade de replicação do fragmento de DNA alvo
Sítios de restrição convenientes
Alternativas para seleção da células recombinantes
Moléculas Pequenas → ?
Moléculas Pequenas → melhores para manipulação
Alternativas para seleção da células recombinantes → ?
Alternativas para seleção da células recombinantes → transformantes ou Células Transformada
Vetor de Clonagem - Tipos de Inserto
Existe um vetor para cada tamanho de inserto.
