Sondas Marcadas Flashcards
Sondas Marcadas - O que irá ocorrer?
Seleção do fago recombinante → que está com o inserto de interesse.
Biblioteca - de Clones do Fago
Contém diversos clones → algum deles contém o meu inserto que eu quero encontrar.
Sondas Marcadas - Realizaremos:
O screamy.
Screamy - O que é? / Objetivo
Seleção dentre as placas de lise formadas → para determinar qual delas tem o fago que tem o gene de interesse.
Sondas Marcadas - 1º Passo
Papel Filtro → faço carimbo.
Sondas Marcadas - Após fazer o carimbo:
Papel Filtro → ?
Placa de Petri com a cultura original → ?
Sondas Marcadas - Após fazer o carimbo:
Papel Filtro → trabalho com ele
Placa de Petri com a cultura original → guardada
Sondas Marcadas - Trabalho com ele → Pego o meu papel filtro e faço procedimento:
Tratamento com solução alcalina → NaOH
Restando → uma membrana seca (filtro)
NaOH - Objetivo
Lisar a cabeça do fago
Separar a dupla fita → ao realizar a desnaturação do DNA → fazendo com que a fita dupla vire fita simples.
Sondas Marcadas - Uma vez tratado o filtro com NaOH:
Secamos essa membrana e a colocamos em contato com a sonda → para fixar o DNA.
Sondas Marcadas - Colocamos a membrana dentro de um recipiente:
Encobrindo ela com uma solução que tenha sonda.
Sondas Marcadas - Uma vez colocando o papel filtro em contato com a sonda:
Sondas → se ligam no papel filtro por inteiro.
Sondas Marcadas - Após as sondas se ligarem no papel filtro por inteiros, nós precisamos:
Lavar o papel filtro para remover as sondas que estão localizadas inespecificamente neste papel.
Sondas Marcadas - Após lavarmos o papel filtro, a sonda deve ser:
Marcada
Sondas Marcadas - Sonda é maraca para:
Fazer o filme.
Marcação - Importância
Ainda não estávamos vendo nada.
