Fracionamento de Ácidos Nucleicos - Etapas ​

Question 1

1 - Lise Celular - Como?

Answer 1

Solução contendo agentes desnaturantes.

Question 2

Agentes Desnaturantes - Exemplos 4

Answer 2

Detergentes (SDS)

Cloreto de Guanidina

Lisozimas

Altas Concentrações de Sal (NaOH)

Question 3

2 - Degradação das Proteínas - Como? 2

Answer 3

Utilizando a Proteinase K.

Utilizando Fenol-Clorofórmio

Question 4

Proteinase K - Função

Answer 4

Degradação das Proteínas.

Question 5

Proteinase K - Função → Ação

Answer 5

Rapidamente inativa as nucleases que degradam o DNA.

Question 6

Proteinase K - Quando a utilizamos?

Answer 6

Faz parte da 2ª etapa → mas usamos junto com a 1ª etapa.

Question 7

Proteinase K - Por que utilizamos ainda na 1ª etapa?

Answer 7

Colocada junto com os fatores de Lise → para já ir degradando as proteínas conforme elas forem liberadas.

Question 8

Fenol-Clorofórmio - O que é?

Answer 8

Eficiente Desnaturante.

Question 9

Fenol-Clorofórmio - Função

Answer 9

Utilizado pra degradar proteínas restantes.

Question 10

Fenol - Característica / Função

Answer 10

Hidrofílico → quem tem afinidade com as proteínas → e as degrada.

Question 11

Clorofórmio - Por que é utilizado junto com o fenol? / Função

Answer 11

Finalidade de remover os resquícios de fenol → para que ele não contamine / danifique o DNA (deve ser íntegro).

Question 12

3 - Purificação do DNA - Como?

Answer 12

Adição de Álcool

Question 13

Álcool - Exemplos 2

Answer 13

Isopropanol

Etanol

Question 14

DNA - Característica

Answer 14

Insolúvel ao álcool.

Question 15

DNA - Uma vez em meio alcóolico:

Answer 15

Tende a formar um aglomerado de moléculas.

Question 16

DNA - Isolamento (Purificação em si):

Answer 16

Durante a centrifugação → o DNA forma um precipitado (pellet) → e fica no fundo do tubo.
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