Colônias - Azul e Branca ​

Question 1

Placa - Contém 5

Answer 1

Bactérias

Meio de Cultura

Antibiótico

IPTG

X-Gal

Question 2

Antibiótico - Qual tipo é colocado na placa??

Answer 2

Tipo → baseado na Marca de Seleção / Método de Seleção → presente no plasmídeo.

Question 3

Antibiótico - Quem não recebeu plasmídeo:

Answer 3

Não sobreviverá no meio de cultura com antibiótico.

Question 4

Após adicionarmos o antibiótico - Observamos a colônia:

Azul → ?

Branca → ?

Answer 4

Após adicionarmos o antibiótico - Observamos a colônia:

Azul → não recebeu o plasmídeo com o inserto

Branca → recebeu o plasmídeo com inserto

Question 5

Colônia Azul → não recebeu o plasmídeo com o inserto:

Answer 5

Gene Lac Z → funciona → produz enzima → hidrolisa X-Gal → tingindo a colônia de azul.

Question 6

Colônia Branca → recebeu o plasmídeo com inserto:

Answer 6

Gene Lac Z → não funciona → não produz enzima → não hidrolisa X-Gal → colônia fica da cor branca.

Question 7

Colônia Azul - Gerada através de:

Answer 7

Uma bactéria que recebeu o plasmídeo → mas vazio, sem inserto.

Question 8

Colônia Branca - Gerada através de:

Answer 8

Uma bactéria que recebeu o plasmídeo → com inserto.

Question 9

Plasmídeo de Expressão Vazio - Por que existe?

Answer 9

Tem inserto para todo mundo → mas a EcoRI → corta o plasmídeo → abrindo ele → liberalizando-o → permitindo 2 coisas.

Question 10

Plasmídeo de Expressão Vazio - Por que existe? → DNAligase permite: 2

Answer 10

Com que o inserto se ligue → e as DNAligase liguem eles

Com que as DNAligases → liguem novamente as partes abertas do plasmídeo uma na outra → recircularizando ele.

Question 11

Plasmídeo de Expressão Vazio - Solução

Answer 11

Utilizar para tratar 2 enzimas diferentes

Question 12

Plasmídeo de Expressão Vazio - Solução → Enzimas 2

Answer 12

Sal I

EcoRI

Question 13

Plasmídeo de Expressão Vazio - Solução → Consequência

Answer 13

Criamos 2 sítios não complementares que não podem se ligar de novo → mas ambos podem se ligar ao inserto e serem ligados ao inserto pela DNAligase.

Question 14

Tratamento com 2 Enzimas Diferentes - Vantagem

Answer 14

Podemos economizar X-Gal → pois a única possibilidade de ligação é o inserto no espaço aberto.

Question 15

Plasmídeos de Expressão - que não ligarem no inserto:

Answer 15

Não se ligam em lugar nenhum → e degradam.

Question 16

Tratamento - 1 Enzima

Answer 16

Possibilidade da ligação dos plasmídeos de volta

2 possibilidades → plasmídeo vazio e com inserto

Gerando 2 colônias → azuis e brancas

Question 17

Tratamento - 2 Enzimas

Answer 17

Não existe a possibilidade de ligação dos plasmídeos de volta.

Eliminamos tudo isso.