FISH - Técnica Flashcards
FISH - Etapas da Técnica 6
Fixação
Desnaturação
Hibridização
Lavagem
Contra-Coloração
Detecção
Fixação - O que ocorre?
Tecido → células devem ser fixadas → em uma lâmina de microscopia.
Desnaturação - Do que? / O que ocorre?
Do material genético nas células fixadas na lâmina → separando a dupla fita dos cromossomos → obtendo fita simples.
Hibridização - Quando a realizamos?
Lâmina + Células Fixadas + Substancia Desnaturastes = DNA fita simples (pronto pra receber sonda)
Hibridização - O que ocorre? 3
Jogamos a sonda → que são complementares ao lugar que queremos encontrar.
Cada sonda diferente → é marcada com fluorescências diferentes.
Essas sondas → são jogadas sobre a lâmina → que é incubada.
Incubação - Durante o período:
Sonda → encontra seu sítio → e se liga por complementariedade de bases → hibridização.
Incubação - Após o período:
4ª etapa → Lavagem
Lavagem - Função
Remover sondas ligadas inespecificamente.
Lavagem - Importância
Remover sondas que se ligaram a lugares inespecíficos → garantindo que somente o que queremos observar fluoresça.
Lavagem - O que ocorre?
Ao lavar → tudo inespecífico são → mas o que é especificou → hibridizou (devido à complementariedade de bases) → então fica agarrado → e não sai na lavagem.
Contra-Coloração - Corantes
DAPI → cor Azul
Propidium iodice → cor vermelha
Contra-Coloração - Função / Importância
Tingir / colorir → material biológico fixado na lâmina → para favorecer o destaque da fluorescência da sonda ligada à esse material.
Contra-Coloração - Característica
Azul → mais utilizado → permite uma maior possibilidade de visualizar o brilho das sondas → durante a deteção.
Detecção - Função
Permite realizar → por exemplo → diagnóstico.
