Cultivo celular Flashcards
(46 cards)
cultivo celular
conjunto de tecnicas que permiten el mantenimiento de las células ‘in vitro’, manteniendo al máximo sus propiedades fisiologicas, bioquimicas y genéticas
in vitro
se refiere a una tecnica para realizar un eterminado experimento en una ambiente controlado fuera de un organismo vivo
cultivo celular
-cultivo bacteriologico
-cultivo celular
cultivo bacteriologico
-microorganismos
-bacterinas, hongos y parasitos
cultivo celular
-celulas eucariotas (ej. organismos pluricelulares)
-sin embargo (unicelulares)
+protozoarios (paramecios, plasmodium, amebas)
+levaduras (hondos microscopicos unicelulares)
-en medicina se referiria a celulas representantes de un tipo celulas especifico (humano o especie de interes)
ciclo de crecimiento microbiano
-curva que describe en ciclo entero de cremiento
-es el reflejo de eventos poblaciones no de celulas individuales
-en general las celulas procariotas crecen más rápido que las eucariotas
fases del ciclo de crecimiento:
-latencia
-exponencial
-estacionaria
-muerte
fase de latencia
-tiempo que tarda en comenzar el crecimiento de un microorganismo tras ser inoculado en medio fresco
-depende de la historia del inóculo, la naturaleza del medio y las condiciones de crecimiento
fl
si un inoculo es fase exponencial se transfiere a medio fresco bajo las mismas condiciones de crecimiento…
no hay esencialmente fase de latencia y prosigue la fase exponencial
fl
si un inoculo proviene de un cultivo viejo, las células están depletas de constituyentes esenciales…
para el crecimiento, se llevara tiempo sintetizarlos
fl
si el medio cambia y se disponen de otros sustratos como fuentes de carbono por ejemplo…
se requiere sintetizar las enzimas que permitiran aprovecharlos, eso lleva tiempo
fase exponencial
-es el estado más saludable de las células
-ideal para el estudio de enzimas u otros componentes celulares
-el numero de células se duplica en intervalos constantes de tiempo
-en un cultivo por lote (tubo cerrado), los organismos no crecen indefinidamente de forma exponencial
un cultivo solo permanece en fase exponencial por un tiempo limitado:
-10 generaciones
1 bacteria pesa:
1x10^-15kg
peso de la tierra:
6x10^24
fase estacionaria
-en realidad la fase estacionaria comienza por agotamiento de nutrientes o acumulación de desechos
-crecimiento crítico en fase estacionaria, no hay incremento neto en el número de células, algunas crecen mientras otras mueren
fase de muerte
-es tambien exponencia, pero tipicamente mas lenta que la exponencial de crecimiento
-las celulas pueden permanecer viables durante meses o incluso años
monitoreo del rendimiento de cultivos por
-las celulas dispersan la luz
-la turbidez de una suspension celular aumenta en la medida en que hay mas celulas presentes
-se mide la luz que atraviesa la suspension sin ser dispersada
espectrofotometria
-2 organismos (tipos celulares):
+pueden tener densidades ópticas diferentes a tiempos similares de medición por diferencias en tamaños y formas o en velocidades de crecimiento
+el mismo valor de OD no necesariamente corresponde al mismo número de células
cuando la turbidez es escesiva se pierde la correspondencia entre el número de células…
y la densidad óptica porque la luz dispersada de la fotocelda por una célula puede ser nuevamente enviada a la fotocelda por otra célula
el cultivo celular a sido desarrollado gracias a:
-medios de cultivo (mucho mas complejos que para cultivo bacteriologico)
-disponibilidad de antibioticos
-instalaciones asépticas (salas, cabinas de flujo laminar, incubadoras)
-dispositivos de cultivo (frascos T, cajas petri)
medios de cultivo
-tamponados para mantener un PH alrededor de 7.4
-indicadores de ph (rojo fenol), cambian de color a medida que aparecen catabolitos ácidos resultando del metabolismo celular
-antibioticos (ej. penicilina, estrreptomicina) y antimicoticos (anfotericina) para impedir la contaminacion
medios de cultivo con suero:
-mezcla poco definida de macromoleculas adicionadas bajo la forma de suero fetal bovino o equino, o extracto crudo de embriones de pollo
medios de cultivo libres de suero:
-quimicamente definidos con moleculas necesarias para la supervivencia y proliferacion como los factores de crecimiento