vc. pcr y sus variantes

Question 1

pcr,puede amplificar selectivamente una secuencia deseasa de adn de copia unica que se encuentra presente en una mezcla compleja de

Answer 1

moleculas de adn sin purificacion previa de la secuencia de interes

Question 2

sintesis de adn durante la pcr

los primers o cebadores (oligonucleotidos) logran que solo se amplifique una zona del adn en

Answer 2

la pcr

Question 3

sintesis de adn durante la pcr

la adn polimerasa termoestable sintetiza la hebra complementaria incorporando los deoxinucleotidos trifosfato (dNTPs) libres (A T G C) del medio de reacción, inicialmente dirigida por

Answer 3

los primers o cebadores

Question 4

sintesis de adn durante la pcr

ciclos controlados de temperaturas de desaturalizacion,

Answer 4

alineamiento y elongacion

Question 5

mezcla de reaccion

Answer 5

dna
primers o cebadores (oligonucleotidos)
taq polimerasa
dNTPs (A T G C)

Question 6

aumentos de t° para romper

Answer 6

los puentes de hidrogeno

Question 7

la t° de desnaturalizacion usualmente es de

Answer 7

94 a 95°c

Question 8

t° mayor o igual a 90°c evitan la

Answer 8

renaturalizacion del dna

Question 9

oligonucleotidos especificos (20-23nt) cuya secuencia es complementaria a los extremos del fragmento (zona del DNA) que se desea amplificar

Answer 9

primers o cebadores

Question 10

al disminuir la t° los primers hibridan especificamente en los extremos de la secuencia

Answer 10

blanco

*un primer en cada hebra

Question 11

los primers dirigen a la adn polimerasa que sintetiza la hebra complementaria incorporando

Answer 11

los nucleotidos libres ( A T G C) del medio de reacción

Question 12

al final del 1er ciclo se obtienen

Answer 12

2 moleculas de ADN doble cadena parcial que contienen la secuencia blanco

Question 13

solo el ADN que contiene la secuencia blanco es copiado ya que la polimerasa solo puede

Answer 13

copiar moleculas que tienen el cebador unido

Question 14

al final de 2do ciclo se han obtenido 4 moleculas de adn doble cadena parcial que contienen

Answer 14

la secuecia blanco

Question 15

al final del 3er ciclo se han sintetizado 8 moleculas de ADN doble cadena que contienen la

Answer 15

secuencia blanco

Question 16

al final del 4to ciclo se han sintetizado

Answer 16

16 moleculas de ADN doble cadena que contienen la secuencia blanco

Question 17

al final de 5to ciclo se tienen

Answer 17

32 moleculas de ADN doble cadena que contienen la secuencia blanco

Question 18

despues de 30 ciclos hay mas de

Answer 18

1x10*9 moleculas del producto especifico y solamente 60 moleculas parcialmente doble cadena mas largas

Question 19

tiene la capacidad de mantener cambios de temperatura ciclicos de forma precisa

Answer 19

maquina de pcr

Question 20

pcr punto final o convencional

podemos considerar que un mayor numero de copias de dna molde da una banda mas

Answer 20

intensa del amplificado (hasta cierto punto ya que cantidades excesivas de dna molde inhiben la reaccion)

Question 21

a mayor numero de ciclos

Answer 21

mayor cantidad del producto de pcr (amplificado)

Question 22

variantes de la pcr

Answer 22

-con adaptadores
-inversa
-mutagenesis dirigida
-rt-pcr
-tiempo real
-rt.qpcr
-multiplex

Question 23

pcr, con adaptadores

amplificar una region de and de secuencia

Answer 23

desconocida

Question 24

pcr, con adaptadores

se unen adaptadores a los fragmentos de restricción de

Answer 24

extremos cohesivos

Question 25

pcr, con adaptadores se añaden primers específicos para las secuencias

Answer 25

de los adaptadores

Question 26

pcr, inversa permite amplificar secuencias desconocidas con la condición de que

Answer 26

se encuentran al lado de una secuencia desconocida

Question 27

se refiere a una amplia variedad de técnicas in vitro que modifican la secuencia silvestre

Answer 27

mutagenes dirigida

Question 28

mutagenes dirigida p, ej. cuando no hay sitios de restricción localizados en

Answer 28

el lugar deseado, se puede emplear un enfoque de pcr

Question 29

mutagenes dirigida se pueden cambiar de 1 a 3 bases en un segmento de dna determinado

Answer 29

sintetizando primers de pcr que lleven a estos cambios

Question 30

rt-pcr se emplean

Answer 30

2 enzimas polimerasas

Question 31

rt-pcr la dna polimerasa rna dependediente (retrotranscriptasa) realiza la

Answer 31

síntesis de cDNA a partir de mRNA

Question 32

rt-pcr los clones de cDNA contienen secuencias codificantes que son

Answer 32

discontinuas (mayoría de genes eucariotas)

Question 33

rt-pcr después el cDNA se amplifica por

Answer 33

PCR (dna pol dna dependiente)

Question 34

pcr tiempo real fluorescencia

Answer 34

-syber green -sondas taqman

Question 35

no es un agente intercalante sino que se asocia a la molecula de and interactuando con la hendidura MENOR

Answer 35

sybergreen

Question 36

el complejo resultante adn-syber green presenta el pico de absorción en 495nm y el de emisión en

Answer 36

522nm (zona verde del espectro, de ahí su nombre)

Question 37

qpcr también conocida como pcr

Answer 37

cuantitativa

Question 38

qpcr amplifica y simultaneamente cuantifica de forma absoluta el producto especifico de la

Answer 38

amplificación

Question 39

qpcr a la mezcla de reacción se adiciona un fluoroforo que emite fluorescencia en función de

Answer 39

la abundancia del producto de amplificación

Question 40

qpcr la medición de la fluorescencia se realiza luego de cada ciclo de amplificación y es

Answer 40

por esto que se le denomina pcr en tiempo real

Question 41

numero de ciclos requeridos para que la fluorescencia especifica sobrepase la fluorescencia de fondo inespecifica

Answer 41

ct

Question 42

ct inversamente proporcional a la cantidad de adn

Answer 42

blanco inicial

Question 43

sondas taq man el principio de la sonda taq man se basa en la

Answer 43

actividad 5'-3' exonucleasa de la polimerasa

Question 44

sondas taq man se aumenta significativamente la especificidad

Answer 44

de la detección

Question 45

sondas taq man al igual que en los otros métodos de qPCR, la fluorescencia resultante de la acumulación del producto se mide durante

Answer 45

la fase exponencial de la pcr

Question 46

Rt-qPCR la primera reacción de retrotranscripcion se lleva a cabo de la misma manera por la dna pol rna dependiente obteniendose el

Answer 46

cDNA a partir del mRNA

Question 47

Rt-qPCR después de cDNA se amplifica por PCR

Answer 47

cuantitativa

Question 48

Rt-qPCR los niveles de expresión de un gen en particular se normalizan con respecto al nivel de expresión de un gen

Answer 48

constitutivo para poder hacer la comparación entre muestras, tratamientos y/o condiciones de la célula

Question 49

pcr multiplex se amplifica mas de una secuencia en una

Answer 49

misma reacción

Question 50

pcr multiplex emplea 2 o + pares de primers en un unico tubo de reacción con el fin de

Answer 50

amplificar simultaneamente multiples segmentos de adna