ve. hibridación de ácidos nucleicos Flashcards

(53 cards)

1
Q

simple y poderosa forma de detectar secuencias especificas de nucleotidos empleando

A

sondas (material genetico) marcadas

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2
Q

las sondas son de cadena sencilla y su reconocimiento es

A

altamente especifico

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3
Q

los ácidos nucleicos involucrados proceden De Fuentes

A

diferentes. previamente no formaban una doble cadena

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4
Q

sonda de 30nt
la secuencia especifica estaria presente al azar en un genoma, una vez cada 430 (1.15x1018) nt genoma humano 3x10*9, poco probable que

A

este simplemente al azar

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5
Q

hibridación

A

-hibridacion in situ FISH
-southern blot (dna)
-northern blot (rna)
-dot blot
-hibridacion de colonias o placas

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6
Q

tecnica de marcaje de cromosomas que permite mapear la ubicación relativa de secuencias diferentes a lo largo de secuencias únicas de dna mediante la hibridacion

A
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Q
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Q
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7
Q

fluorescentin situ hybridization

tambien permite localizar la expresion genica en

A

un tejido

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7
Q
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Q
A
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8
Q

fluorescentin situ hybridization

desarrollada inicialmente en 1969 con

A

marca radiactiva

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Q
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Q
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Q
A
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8
Q
A
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9
Q

fluorescentin situ hybridization

se realiza cuando se sospecha de una anormalidad cromosomica en algun sindrome concreto habiendo excluido

A

otras posibilidades no geneticas

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10
Q

tipos de sondas

A
  1. especificas de locus
  2. fusión dual
  3. doble color para ruptura
  4. centromericas (satelites)
  5. telomericas
11
Q

tipos de sondas

-anomalias cromossômicas numéricas (aneuploidias)
-especificas para una región cromosomica única
-en la imagen se deben ver 2 señales por núcleo

A

especificas del locus

12
Q

aneuploidias

A

-monosomia: falta uno de los cromosomas de un par
-trisomia: mas de dos cromosomas en lugar de un par

13
tipos de sondas ej. trisomia del cromosoma 21, sx de down
especificas del locus
14
tipos de sondas anomalias cromosomicas estructurales: -deleción -duplicacion -una delación o duplicación de la región cromosómica dará origen a una señal o + de 2 señales, respectivamente
especifica del locus
15
se pierde o se elimina parte del cromosoma
deleción
16
se duplica parte del cromosoma
duplicación
17
fusion dual se unen a regiones contiguas al punto de
traslocación
18
fusion dual -anomalia cromosomica estructural -se transfiere una parte de un cromosoma a otro
traslocación
19
doble color para ruptura revelan eventos de
traslocación
20
doble color para ruptura se unen al cromosoma intacto flanqueando el
punto de ruptura
21
doble color para ruptura cuando la translocacion ocurre, la sonda se
separa
22
centromericas (satelites) hibridan en las regiones repetidas que rodean los
centromeros
23
centromericas (satelites) pueden tambien detectar aneuploidia de
cualquier cromosoma
24
telomericas utiles para revelar pequeñas deleciones o translocaciones que no son faciles de
visualizar en el cariotipo estandar
25
objetivo del northern blot y southern blot
identificar secuencias de interes en el acido nucleico inmovilizado en una matriz de papel, nylon o nitrocelulosas
26
northern blot y southern blot la transferencia puede ser
pasiva o electrotransferencia
27
northern blot y southern blot ej. dna genomico digerido previamente con enzimas de restriccion
southern blot
28
northern blot y southern blot ej. analisis de expresion niveles del nRNA
northern blot
29
sonda marcada o acoplada a una etiqueta fosforo radiactivo
32P
30
sonda marcada o acoplada a una etiqueta digoxigenina DIG, formada por
-anticuerpos especificos aDIG -anticuerpo acoplado a fosfatasa alcalina -sustrato quimioluminiscente
31
southern blot para la interpretacion se debe considerar la muestra que se esta
analizando y lo que representa el que haya o no reconociminto especifico de la sonda empleada
32
analisis de la expresion de genes
-niveles de proteina (proteomica) -niveles de mRNA *RT-qPCR *Northen Blot *Microarreglos
33
uno o pocos genes a la vez
*RT-qPCR *Northen Blot
34
varias decenas,cientos o miles de genes al mismo tiempo
microarreglos
35
nivel de expresion de un gen relacionado con el cuadro clinico
northern blot
36
dot blot util tanto para muestras de DNA como de
RNA
37
dot blot en vez de hacer la separacion electroforetica en gel de cada una de las muestras, estas se aplican con
un capilar en la membrana directamente
38
dot blot permite analizar de forma rapida la presencia de
una secuencia especifica en una muestra determinada
39
hibridacion de colonias o placas la membrana se pone en
contacto con las colonias
40
hibridacion de colonias o placas la membrana se trata de forma que se promueve que el dna o
rna quede expuesto y pueda hibridar con la sonda marcada
41
hibridacion de colonias o placas la colonia identificada de esta forma puede ser
resembrada o expandida