BIO / PHY - ANALYSES BIOCHIMIQUES - MODULE 1 Flashcards
Citer les différentes propriétés physico-chimiques utilisées dans les méthodes d’analyses
Les méthodes les plus utilisées reposent sur des propriétés physico-chimiques : solubilité, taille,
densité, charges. Ce sont :
* la précipitation ; solubilite
* la dialyse ; masse moleculaire
* l’ultracentrifugation ; densite
* la chromatographie ;
* l’électrophorèse ;
* la réaction du biuret.
Définir la précipitation
La précipitation permet d’isoler des molécules au sein d’une solution. Elles perdent leur solubilité, ce qui
permet de les séparer des autres substances de la solution.
Citer 2 réactifs chimiques pouvant entraîner la précipitation de molécules
Elle peut être obtenue par :
* des sels (procédé appelé relargage) : on utilise très souvent le sulfate d’ammonium ;
* des solvants organiques (acétone, TCA - acide trichloracétique).
Définir la dialyse
Principe : c’est une méthode d’analyse qui permet la séparation des constituants d’une solution en
fonction de leur masse moléculaire.
Présenter le principe de la dialyse
un échantillon est placé dans une membrane à pores connus, puis immergé dans un tampon pour permettre la diffusion des ions ou molécules à travers la membrane. Les molécules trop grosses pour passer à travers les pores restent piégées. Bien que ce soit efficace, le processus est lent car il dépend de la diffusion pour établir l’équilibre des concentrations entre les deux compartiments.
Définir l’ultracentrifugation
C’est une méthode d’analyse permettant de séparer des molécules placées dans un
champ de force centrifuge, en fonction de leur densité : les molécules les moins
denses sont dans le surnageant, les plus denses dans le culot.
Citer une application importante de l’ultracentrifugation
L’ultracentrifugation est une méthode très utilisée pour :
* séparer les différentes fractions à partir d’un broyat cellulaire ;
* séparer les lipoprotéines plasmatiques (voir cours sur les lipoprotéines).
Définir la chromatographie
Principe : la chromatographie est une technique analytique qui permet la séparation des constituants
d’un mélange, en phase liquide ou gazeuse.
Différencier phase mobile et stationnaire
Il y a :
* une phase mobile dans laquelle la substance à analyser peut se dissoudre (s’il s’agit d’une phase
liquide) ou se vaporiser (s’il s’agit d’une phase gazeuse) ;
* une phase stationnaire, emprisonnée dans la colonne, avec laquelle la substance aura plus ou
moins d’affinité, donc d’interactions.
Définir le terme “temps de rétention”
Le “temps de rétention” désigne la durée pendant laquelle un composant reste dans le système de chromatographie avant d’être détecté ou sorti du système.
Faire le lien entre la structure des molécules à séparer et le temps de rétention
Les molécules de l’échantillon parcourent la colonne avec des temps de rétention proportionnels à leurs
propriétés (taille, structure, …) et à leur affinité avec la phase stationnaire : si les interactions entre les
molécules à analyser au sein de la phase mobile et la phase stationnaire sont faibles, les molécules seront
éluées (= éliminées de la phase stationnaire) rapidement (et inversement).
A leur arrivée en bout de colonne, un détecteur mesure la quantité de chacun des constituants du mélange.
Citer une application importante, illustrer avec cette application la compétence précédente (Faire le lien entre la structure des molécules à séparer et le temps de rétention)
Application : chromatographie en phase gazeuse (CPG) des acides gras.
les acides gras ont un temps de
rétention qui varie en fonction de leur structure.
Présenter simplement le principe de la chromatographie d’exclusion et de la chromatographie
échangeuse d’ions
Chromatographie d’exclusion :
La phase stationnaire est composée de billes perforées de pores de taille similaire à celle des molécules à séparer. Les molécules plus grandes que les pores se déplacent plus rapidement en se faufilant entre les billes. En revanche, les molécules plus petites pénètrent dans les pores du gel, ce qui les retarde, et elles sont éluées plus lentement. Les molécules émergent dans l’ordre des masses moléculaires décroissantes.
Chromatographie échangeuse d’ions :
Dans cette méthode, la phase stationnaire contient des groupements ionisés (+ ou -) fixés sur la colonne. Les molécules ionisées à séparer, telles que les acides aminés ou les protéines, sont retenues près des charges fixées sur la colonne. Elles peuvent ensuite être séparées en utilisant un éluant qui modifie le pH et donc les charges des molécules à séparer.
Définir l’électrophorèse
L’électrophorèse est une méthode d’analyse qui permet de séparer des molécules chargées, placées dans
un champ électrique.
Citer une application importante de l’électrophorèse
Une application importante de l’électrophorèse est la séparation des acides nucléiques, tels que l’ADN et l’ARN, ainsi que des protéines.
