Fracionamento de Ácidos Nucleicos - Etapas ​ Flashcards Preview

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Flashcards in Fracionamento de Ácidos Nucleicos - Etapas ​ Deck (16):
1

1 - Lise Celular - Como?

Solução contendo agentes desnaturantes.

2

Agentes Desnaturantes - Exemplos 4

Detergentes (SDS)

Cloreto de Guanidina

Lisozimas

Altas Concentrações de Sal (NaOH)

3

2 - Degradação das Proteínas - Como? 2

Utilizando a Proteinase K.

Utilizando Fenol-Clorofórmio

4

Proteinase K - Função

Degradação das Proteínas.

5

Proteinase K - Função → Ação

Rapidamente inativa as nucleases que degradam o DNA.

6

Proteinase K - Quando a utilizamos?

Faz parte da 2ª etapa → mas usamos junto com a 1ª etapa.

7

Proteinase K - Por que utilizamos ainda na 1ª etapa?

Colocada junto com os fatores de Lise → para já ir degradando as proteínas conforme elas forem liberadas.

8

Fenol-Clorofórmio - O que é?

Eficiente Desnaturante.

9

Fenol-Clorofórmio - Função

Utilizado pra degradar proteínas restantes.

10

Fenol - Característica / Função

Hidrofílico → quem tem afinidade com as proteínas → e as degrada.

11

Clorofórmio - Por que é utilizado junto com o fenol? / Função

Finalidade de remover os resquícios de fenol → para que ele não contamine / danifique o DNA (deve ser íntegro).

12

3 - Purificação do DNA - Como?

Adição de Álcool

13

Álcool - Exemplos 2

Isopropanol

Etanol

14

DNA - Característica

Insolúvel ao álcool.

15

DNA - Uma vez em meio alcóolico:

Tende a formar um aglomerado de moléculas.

16

DNA - Isolamento (Purificação em si):

Durante a centrifugação → o DNA forma um precipitado (pellet) → e fica no fundo do tubo.

Decks in Biotecnologia - 2018 Class (117):