Vetores - YAC

Question 1

YAC - Yeast

Answer 1

Leveduras

Question 2

YAC - Levedura

Answer 2

Saccharomyces cerevisiae

Question 3

YAC - Clonar inserto de até:

Answer 3

1~2mb / 1~2 milhões pb

Question 4

YAC - Se você for usar um BAC, que suporta até 300 mil, temos que usar o YAC, mas é se não tivermos?

Answer 4

Podemos utilizar vários BACs ou até mesmo outros tipos.

Question 5

YAC - Composição 3

Answer 5

Centrômero → CEN

Telômero → TEL

Sequência de Replicação Autônoma de Leveduras → ARS

Question 6

YAC - Região Centromérica → Importante para:

Answer 6

Vetor → permanecer de forma única dentro da célula → dando estabilidade na replicação → para que cada célula filha receba o YAC.

Question 7

YAC - Telômeros → Função 2

Answer 7

Impede o encurtamento

Proteger da degradação → enzima BamHI

Question 8

YAC - ARS

Answer 8

Origem de replicação

Question 9

YAC - Levedura → O que é?

Answer 9

Eucarioto Inferior

Question 10

Levedura - Importância 2

Answer 10

Proteínas → bastante semelhança com as de células de mamíferos → também com semelhança na funcionalidade.

Podemos utilizar leveduras para estudar células de mamíferos → porque células de mamíferos são muito caras para serem utilizadas diretamente.

Question 11

YAC - Vantagens

Answer 11

Podem ser clonados → genes humanos inteiros

Question 12

YAC - Desvantagens

Answer 12

Estabilidade → são menos estáveis que BAC

Question 13

YAC - Desvantagens → Devido ao tamanho do vetor:

Answer 13

Podem perder ele.

Question 14

YAC - Métodos de Seleção 2

Answer 14

URA3 → uracila

TRP1 → triptofano

Question 15

Levedura - Naturalmente

Answer 15

Não produz triptofano e nem uracila → devemos adicionar artificialmente.

Question 16

YAC - Quem recebe o vetor:

Answer 16

Irão conseguir produzir uracila e triptofano → e isso nos permite selecionar as células.

Question 17

YAC - Marcas de Seleção 2

Answer 17

Triptofano / Uracila → estratégia que o vetor da para a célula produzir ambos

AMP^r

Question 18

AMP - Colocada no meio

Answer 18

Cultura que cresceu no meio → irá ter resistência ao ATB.

Question 19

YAC - Enzimas de Restrição 2

Answer 19

BamHI → Linearização

EcoRI → Inserto

Question 20

YAC - As sequências TRP1 e URA3 codificam genes marcadores de seleção, permitindo:

Answer 20

Um fácil isolamento das leveduras que apresentarem o cromossomo.

Question 21

YAC - Comportam-se como:

Answer 21

Cromossomos → moléculas lineares.

Question 22

YAC - Cópias por célula:

Answer 22

1

Question 23

YAC - Processo

Answer 23

Cortamos o vetor com EcoRI → colocamos o inserto → adicionamos DNAlig → obtendo o vetor linearizado.

Então tratamos com Bam HI → cortando o vetor novamente em outro ponto → obtendo um vetor linearizados.

Question 24

YAC - Ao colocar o vetor linearizado na célula:

Answer 24

Corremos o risco das nucleares degradarem o vetor.

Question 25

YAC - Como corremos o risco das nucleases degradem o vetor:

Answer 25

Colocamos esperma de salmão → que se liga à região → protegendo as extremidades teloméricas da degradação.

Question 26

Esperma de Salmão - Importância

Answer 26

Se não adicionarmos o esperma de salmão → teremos uma baixa eficiência de clonagem.